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授課老師:林立元教授
分光光度計(光譜儀)之外觀與原理
分光光度計(光譜儀)之外觀與原理
光譜儀外型
光譜儀外型
黑色不透光金屬外殼，表面有滑門、螢幕、校正/測量按鈕及光線強度旋鈕
光譜儀原理簡圖
光譜儀原理簡圖
光源發出特定波長光線(簡易光譜儀使用特定波長LED，全波長光譜儀使用狹縫分光)，先測量對照組取得空白值，在測量樣品，計算該物質於該波長的吸光值
光譜儀基礎操作1：紅墨水吸收光譜分析
光譜儀基礎操作1：紅墨水吸收光譜分析
由實驗可知，紅墨水在波長615奈米時吸光值最低，且長波長吸光值明顯高於短波長，而波長615、648奈米的光皆為紅色系，與紅墨水透光呈現紅色相符。
以精密分光光度計進行全光譜掃描，可以發現紅墨水對528.0nm光的吸光值最高
光譜儀基礎操作2：探討濃度對吸光值的影響
光譜儀基礎操作2：探討濃度對吸光值的影響
由實驗1可知，紅墨水的吸光值(於有限LED中)最大在515nm，因此以515nmLED為光源，探討紅墨水濃度差異對吸光值的影響
葉綠體光反應實驗
葉綠體光反應實驗
實驗準備：製作葉綠體濾液
實驗準備：製作葉綠體濾液
將莧菜葉以研缽搗碎、加入蔗糖液，將葉綠體過濾出來。
葉綠體濾液須稀釋至吸光值0.4~0.6之間，此時的稀釋倍率為8倍。
在比色管中加入2ml的葉綠體濾液，並加入100μl的DCIP。
Ps. DCIP原本為藍色，在光反應中可以取代NADP+作為接收電子的角色， DCIP接收電子(還原)後會變為無色，因此在實驗中可做為判斷光反應是否進行的依據。
實驗1：光線對於葉綠體光反應的影響
實驗1：光線對於葉綠體光反應的影響
[不照光] 將比色管留在光譜儀中，避免光線照射，每30秒紀錄一次吸光值。
[照光] 持續以手電筒貼在比色管管口照射，每30秒紀錄一次吸光值。
不照光的葉綠體溶液在2分鐘內測得的吸光值都相同，代表其中的DCIP沒有被還原，光反應並未發生；
另一管接收照光的葉綠體溶液在照光30秒後吸光值大幅減少，後續的減少量趨緩，最後幾乎沒有變化，
推測光反應可能在前30秒接近反應完全。
實驗2：DCMU對於葉綠體光反應的影響
實驗2：DCMU對於葉綠體光反應的影響
Ps.DCMU能夠抑制光反應進行，使光反應的電子傳遞鍊停止。也有作為除草劑的功用。
在這部分的實驗需先讓DCMU和葉綠體濾液反應2分鐘，再加入測試光反應是否發生的DCIP。
[加入高濃度DCMU] 在加入DCIP之前先加入100µL DCMU反應兩分鐘，再以手電筒照射，每30秒記錄一次。
[加入低濃度DCMU] 在加入DCIP之前先加入100µL DCMU反應兩分鐘，再以手電筒照射，每30秒記錄一次。
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