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Normas de trabajo en el laboratorio de microbiología.
Reconocimiento de equipos y material de laboratorio.
Objetivos
1 Conocer las normas de funcionamiento del laboratorio de Microbiología Ambiental.
2 Identificar los principales equipos y materiales de uso común para el estudio microbiológico
INTRODUCCIÓN
Todas las personas que trabajan con materiales que contengan agentes infecciosos deben estar conscientes de los peligros potenciales asociados a estos agentes, además deben estar entrenadas en las prácticas y técnicas requeridas para manejar estos materiales de una manera segura.
Es por ello que antes de comenzar con las actividades prácticas, todas las personas involucradas (estudiantes y profesores) tenemos la obligación de conocer cuáles son las normas de seguridad a seguir en el laboratorio de manera tal, que el trabajo se realice con un riesgo mínimo de exposición, tanto para las personas que lo ejecutan como para el medio ambiente.
El objetivo general de esta lectura, es ofrecerle al estudiante una guía para que realice sus actividades prácticas en el Laboratorio de Microbiología de una manera adecuada y segura.
BIOSEGURIDAD
La seguridad biológica o bioseguridad, es la aplicación del conocimiento, de las técnicas y de los equipos necesarios para prevenir la exposición del personal, del área de laboratorio y del medio ambiente a agentes potencialmente infecciosos o biopeligrosos.
Agentes Biopeligrosos
Son todos aquellos agentes biológicos y materiales que son potencialmente peligrosos para los seres humanos, los animales y las plantas. Entre ellos podemos citar: bacterias, virus, viroides, viriones, hongos, parásitos, productos recombinantes, alérgenos, priones, etc.
Riesgo Microbiológico
En el Laboratorio de Microbiología existen dos fuentes principales de peligros biológicos, uno de ellos lo representa el procesamiento de muestras provenientes de un paciente o ambiente en concreto y en segundo lugar el manejo de cultivos de microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones muy elevadas y pueden llegar a provocar una infección si no son manipulados con precaución.
El Riesgo Microbiológico se encuentra presente cada vez que realicemos una actividad práctica en el Laboratorio de Microbiología, razón por la cual debemos llevarlas a cabo con precaución, además de tener un ambiente de trabajo en el que seamos capaces de reconocer y evitar los peligros involucrados con estas actividades, para así poder evitar posibles accidentes.
Infecciones Adquiridas en el Laboratorio
Se dice que ocurre una contaminación en un Laboratorio Microbiológico, cuando un microorganismo, capaz de causar enfermedad, entra al cuerpo de un individuo en una concentración suficiente y a través de una ruta determinada, siendo capaz de vencer las defensas del individuo.
Una Infección Adquirida en el Laboratorio (IAL) es aquella que resulta de una tarea realizada en el Laboratorio de Microbiología, tanto por el operador como por cualquier otra persona que pudo quedar expuesta, como resultado de la manipulación de un determinado agente infeccioso.
Vías de Infección
Los microorganismos pueden ingresar al organismo a través de: la boca, los pulmones, la piel (intacta o lesionada), la conjuntiva, etc. En las IAL, la ruta de entrada no es necesariamente la misma que cuando la enfermedad se adquiere en forma natural.
Las vías de contaminación más frecuentes en el laboratorio se dan a través de:
La boca
Comer, beber y fumar en el laboratorio.
Realizar transferencias con pipetas sin utilizar ningún tipo de protección.
Transferencia indirecta de microorganismos a través de los dedos o utensilios
contaminados (lápices, bolígrafos, etc.).
La piel
Inoculación accidental con una aguja hipodérmica u otros instrumentos punzantes o de vidrio.
Cortaduras o rasguños.
Los ojos
Salpicaduras de materiales infecciosos.
Transferencia indirecta de microorganismos a través de los dedos contaminados.
Los pulmones
Inhalación de microorganismos transportados por el aire (aerosoles).
Normas de funcionamiento del laboratorio de Microbiología
Información General y sistema de evaluación
1. La practica tiene una duración de 2 horas académicas por semana
2. La pérdida de alguna de las practicas requiere la justificación de la inasistencia por medio de la presentación de un justificativo medico expedido o avalado por los servicios médicos de la universidad.
3. La puntualidad para la actividad es de importancia, el alumno que llegue diez (10) minutos después de la hora de inicio no podrá entrar a la misma y una vez comenzada la sección practica el alumno no podrá retirase de esta sin previa consulta sin permiso del docente.
4. Al perder el 25% de las secciones prácticas trae como consecuencia la perdida de la asignatura.
5. Las evaluaciones son continuas cada sección practica tiene un pre-laboratorio (examen) y post-laboratorio (reporte), con valor de 1,5% cada uno, al final de todas las secciones practicas el alumno debe entregar y defender un informe final de practica con valor de 5%.
6. Antes de cada sección práctica lea la practica correspondiente y sobre el tópico a estudiar antes de acudir al laboratorio.
Medidas de seguridad dentro del laboratorio
1. La existencia de contaminación en un laboratorio de microbiología obliga a realizar el trabajo bajo las mas
estrictas condiciones de asepsia, en completo orden, aunque los microorganismos que se manipulan en el
laboratorio son por lo general no patógenos el alumno se debe ceñir a al cumplimiento de las NORMAS DEL LABORATORIO. En primer lugar evite contacto de las, manos, Cabello, ropas, o utensilios escolares con el material procedente de los cultivos o material contaminado en el laboratorio.
2. Para esto el alumno debe poner entender y poner en práctica las técnicas de asepsia necesarias par la manipulación del material para evitar la contaminación del estudiante o del material con el que se está trabajando
Normas para el ingreso y trabajo en el laboratorio de microbiología ambiental.
1. Es necesario tener presente que el alumno en la sección practica debe tomar nota sobre los procesos, métodos, datos e información en general suministrara el instructor para cada sección practica, por lo que es necesario una libreta o cuaderno de anotaciones, junto a un otros utensilios que permitan la toma de estos datos como: lápiz, sacapuntas, borrador, bolígrafo, marcador, regla o escuadra entre otros. TOME PRECAUCIONES para este caso y evite el préstamo de los mismos por razones de seguridad dentro del laboratorio.
2. Para el ingreso y durante la permanencia del alumno dentro del laboratorio es de carácter OBLIGATOIO el uso de la bata de laboratorio de color blanco, largas y con mangas largas.
3. Antes de cada sección apague o coloque función de vibración el teléfono celular. Esta terminante mente PROHIBIDO en uso del celular dentro del laboratorio.
4. Reducir al mínimo la formación de aerosoles durante la realización de cualquier trabajo práctico.
5. NUNCA deposite libros, carteras, bolsos, bultos, morrales y otros objetos similares sobre los mesones destinados para realizar el trabajo práctico, SOLO SE PERMITE, cuaderno de notas la guía de práctica y lo necesario para las anotaciones correspondientes.
6. Para realizar el trabajo práctico se EXIGE: la guía práctica, utensilios para anotaciones, lápiz graso o marcador y fósforos o encendedor.
7. El estudiante es RESPONSABLE del material que se le suministra por lo tanto, la perdida por, daño, roturas o desaparición, deberá ser repuesto por el o los alumno(s) responsable(s).
8. REPORTAR inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno será catalogado como menor.
9. Al INICIAR y FINALIZAR la sección de trabajo cada estudiante esta en la obligación de limpiar su sitio de trabajo, que será supervisado por el personal designado.
10. No DEVOLVER sustancias a sus envases originales.
11. EMPLEAR la propipeta al medir líquidos biopeligrosos.
12. REALIZE solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo experimentos no autorizados.
13. Durante las secciones prácticas adquiera y mantenga hábitos de higiene personal
a. Los cabellos largos deben estar RECOJIDOS sobre la nuca
b. No USAR joyas de ninguna especie durante la practica
c. Por ninguna causa se lleve OBJETOS a la boca como lápices, bolígrafos, o cualquier otro material.
d. No TOCARSE los ojos, el pelo, las fosas nasales, oídos, boca dentro del laboratorio.
e. Esta PROHIBIDO comer o tomar cualquier tipo de alimento dentro del laboratorio.
f. No FUME en el laboratorio.
g. NUNCA humedezca con saliva alguna etiqueta, use agua.
h. NO use el material de laboratorio para beber.
i. EVITE hablar sobre el material de trabajo.
j. No HALE ni EMPUJE a personas, ni permita que lo hagan terceros cerca del área de trabajo por cuanto esto contraviene las normas de asepsia.
k. EVITE deambular por el laboratorio para evitar accidentes, y provoca corrientes de aire y polvo que promueven contaminaciones.
l. DESCARTE los cultivos en los lugares destinados para tal fin.
m. Si tiene dudas sobre algún procedimiento, no DUDE en consultar al personal o instructor esto puede evitar accidentes.
n. Esta terminantemente PROHIBIDO sacar material, reactivo, o equipos del laboratorio.
o. Antes de abandonar el laboratorio LAVE y DESINFECTE sus manos. Se recomienda lavar su bata ese mismo día para evitar que esta se convierta en una superficie de crecimiento de microorganismos.
MEDIDAS EN CASO DE EMERGENCIA
A continuación mencionaremos los pasos que se deben seguir en caso de que
ocurran los siguientes accidentes:
-Derrame de material biológico sobre el cuerpo
Remover la ropa inmediatamente.
Lavar vigorosamente el área expuesta con agua y jabón por un minuto.
Reportar el incidente al profesor.
Buscar atención médica si es necesario.
La ropa contaminada debe ser colocada en una solución desinfectante antes
de ser lavada.
-Salpicaduras en los ojos con materiales biopeligrosos
Lavar inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del párpado con
abundante agua durante 15 minutos aproximadamente. Abrir el ojo para asegurar efectivamente el lavado, comenzando por los párpados.
Reportar el incidente al profesor.
-Buscar atención médica inmediatamente.
Cortadas menores y heridas por pinchazo
Lavar vigorosamente la herida con agua y jabón por varios minutos.
Reportar el incidente al profesor.
-Buscar atención médica inmediatamente.
En el caso de derrames
Reportar el incidente al profesor.
Limpiar y desinfectar inmediatamente el área.
La persona que realice la operación debe llevar puesto guantes. Para limpiar la
porción del derrame, los trozos de vidrio rotos y/o cultivo deben cubrirse con
toallas de papel impregnadas en solución desinfectante.
Al cabo de diez minutos debe limpiarse empleando nuevas toallas de papel y desinfectante.
El material contaminado debe ser colocado en un recipiente para material
contaminado o bolsa de desechos, la cual debe esterilizarse junto con los
guantes utilizados.
El éxito de estas normas depende de la sinceridad, la constancia, la participación activa y cooperativa de cada estudiante, por ello antes de asistir al laboratorio, deben leer el fundamento y las actividades a realizar, para así evitar posibles accidentes, con el conocimiento y las técnicas de trabajo apropiadas.
Reconocimiento de equipos y material de laboratorio
El material de laboratorio de vidrio debe reunir las siguientes condiciones
Ser resistente al calor húmedo (autoclave) o al calor seco (horno)
Resistente a los lavados
Resistente a los ácidos y las bases
Reaccionar como un material inerte al pH (vidrio neutro) es deir que no induzca variación el pH de sustancias que contenga.
Materiales de cristalería
Laminas portaobjeto
Laminas portaobjeto excavada con una o dos cavidades
Son rectangulares tamaños con 75 mm de largo y 25 mm de ancho y 1mm de espesor. Algunas poseen un lugar especifico para su rotulación. Existen otras laminas como las escavadas y graduadas entre las que destaca la llamada cámara de Neuvauer.
Cámara de Neubauer
Lamina cubreobjeto
Existen de diferentes tamaños y formas cuadradas, rectangulares y redondas, las mas utilizadas son las dos primeras ente las que destaca la cuadrada con un tamaño de 22 x 22 mm, y la ultima es útil para preparaciones permanentes.
Tubos de ensayo
Estos recipientes de vidrio o plástico varían en tamaño, pueden presentar un bisel en sus lados para anotaciones, otros son lisos. Algunos poseen tapa con rosca y otros son lisos para colocar diferentes tipos de tapones, ya sea algodón o de goma. En su parte inferior pueden presentar forma de u o v estos últimos poseen esta forma característica para ser usados en la centrifuga, y en ocasiones en ocasiones esta graduado.
Tubos de fermentación Durham
Son tubos de ensayo pero de menor tamaño y diámetro 50 X 6 mm, se usa colocándolo invertido dentro de un tubo de ensayo de tamaño mayor, este es útil para evidenciar la presencia gas producido por ciertos microorganismos que fermentan carbohidratos.
Vasos precipitados o beakers
Estos recipientes son por lo general de forma cilíndrica con un fondo plano en el borde posee una depresión que permite el vaciamiento de ls contenidos en su interior.
Fiolas o frascos de Erlenmeyer
Este tipo de instrumento posee un cuello mas corto que aumenta de tamaño hacia su base, por lo general esta graduado en diferentes volúmenes, es útil para la mezcla de soluciones en su interior.
Frasco Kitasato
Este instrumento es similar al anterior con la diferencia que este posee un prolongación lateral cerca de la desembocadura superior que permite conectarlo a través de mangueras para generar un vacio, cuando se desea filtrar soluciones o medios de cultivo.
Frasco Goteros
Estos recipientes de vidrio son de tamaños diversos aunque por lo general tienen tamaño de 24 a 50 cc y consistencia gruesa, en su tapa poseen una ranura que permite la salida del liquido contenido en interior en forma de gotas
Cilindros graduados o probetas
Estos cilindros poseen una base que le provee estabilidad al cuerpo del cilindro, y en su parte superior posee una depresión que permite el vaciado del contenido colocado en su interior, este instrumento es útil para medir con exactitud diferentes tipos de soluciones.
Placa de Petri
Este instrumento consta de dos disco de vidrio o plástico que encajan uno sobre otro ya que ambos poseen diámetros diferentes, son un instrumentos clásico para contener medios sólidos, y semisólidos útiles para la siembra de microorganismos.
Embudos
Son instrumentos de forma cónica con una prolongación en forma de bisel que permite filtrar soluciones a través de su interior a través del papel filtro o verter soluciones en embaces de diámetro pequeño.
Pipetas
Son cilindros de diámetro pequeño, alargado que permiten tomar soluciones para ser vertidas en otros instrumentos de vidrio, por lo general se encuentran graduadas poseen tamaños variados y son de uso común en todo tipo de laboratorio existen varios tipos las terminales cuyo aforo incluye la punta por lo que al descartar el liquido en su interior se debe colocar hasta la ultima gota, las subterminales, este tipo de pipeta esta graduada o calibrada sin incluir la punta por lo que al agregar el liquido en su interior no se debe descarta el contenido presente en su punta, existen diferentes tipos de volúmenes de pipetas de 1,2,5,10,20 ml. Existe otro tipo de pipeta volumétricas o aforadas las cuales poseen un aforo graduado en un volumen constante que puede ser terminal o subterminales, algunas con un bulbo caracterismo de este tipo de pipeta.
Pipeta Pasteur
Esta pipeta puede ser de plástico o vidrio de diámetro corto que permite contener líquidos en su interior tomados de zonas estrechas que no requieren cuantificación.
Varilla de vidrio
Es un cilindro de vidrio con extremos redondeados, con diferentes longitudes y diámetros variados, útil para mezclar soluciones y medios de cultivo.
Vidrio reloj
Este instrumento permite contener muestras para su traslado y calentamiento
Jarra de Coplin
Es un instrumento de vidrio de forma rectangular con sin ensanchamiento que posee ranuras en su interior que permite colocar laminas portaobjetos, se utiliza para realizar coloraciones o decolar, al igual que permite una base para eliminar el aceite de inmersión (xilol)
Cestillo de vidrio
Este instrumento permite la coloración de los preparados en portaobjetos.
Espátula de Drigalsky
Esta es una varilla de vidrio curvada en forma de L o de triangulo que permite la inoculación de suspensiones en superficies planas en placas de Petri.
Mortero
Consiste en un instrumento de vidrio o de porcelana con un mazo y un romo que permite triturar medios, muestras u otro elemento que lo necesite para el trabajo en el laboratorio.
Campana de vidrio o Desecador
Este instrumento es un recipiente de vidrio que consta de un cuerpo y una tapa de grosor considerado que permite colocar en su interior sales higroscópicas que absorben la humedad de reactivos sólidos que accidentalmente han absorbido agua; en los laboratorios de microbiología, es útil para mantener microorganismos que requirieren condiciones de microaerofilia es decir concentraciones altas de CO2 y baja presión de oxigeno.
Espátula
Pueden ser de metal, vidrio, o mixta de metal y madera de tamaños diversos y medidas diversas.
Lavado del material
Se descarta el contenido de su interior, y se lava con agua preferiblemente caliente, con jabón, cepillo o esponjas según sea necesario. En caso de tubos de ensayo existen cepillos para tubo de ensayo que permite una correcta limpieza de su interior.
Luego del procedimiento anterior se lava con agua a temperatura ambiente y luego se enjuaga dos veces con agua destilada.
Se puede dejar escurrir con la llama del mechero encendida o secar en un horno o incubadora a 37 ºC (no hablar en este proceso o utilizar tapa boca para evitar contaminar el material).
Luego se procede a envolver para proceder a la esterilización y colocar un papel indicador.
Si la cristalería esta manchada se recomienda desmanchar con diferentes tipos de soluciones acidas, como una solución de HCL al 0,2% por 2 horas, o una solución sulfocrómica preparada 1000 ml de agua destilada, 100 ml de ácido sulfúrico y 50g de Bicromato de potasio aunque esta solución se recomienda no utilizar como rutina solo en caso de cristalería opaca o manchada.
Equipos del laboratorio.
Baño de María: Es un equipo de acero inoxidable, útil para calentar soluciones y medios de cultivo contenidos en recipientes, consta de un termostato para regular la temperatura y un control de nivel de agua, útil para la preparación de medios y técnicas que requieran calor moderado.
Incubadora
Es un equipo diseñado con material refractario y resistente al calor y que permite mantener un calor constante que favorece el crecimiento de los microorganismos.
Contador de colonias
Este equipo esta provisto de una cuadricula iluminada y una lupa que facilita el contaje de as placas de Petri
Agitador Vortex
Este sistema posee uno o varios cabezales de goma que al presionar genera movimientos oscilatorios, útil para facilitar las mezclas en tubos de ensayo, tubos eppendorf o incluso otros material de vidrio que se desea agitar.
Gradilla
Estos andamios estructurales permiten tener y organizar a los tubos de ensayo de forma vertical además de ser un sistema que permite moverlos, son diversos y variados ya que encontramos gradillas de madera, Metal, plástico etc.
Mechero de Bunsen
Este dispositivo se conecta con la manguera de gas en su extremo inferior posee una válvula para regular el gas y las características de la llama depende de la cantidad de gas la apertura de la valvula y la posición del collar que controla la entrada de aire. Si la cantidad de gas suministrado es mayor la llama será tambien mayor, pero si la canidad de oxigeno es baja la llama será de color azul de menor temperatura, a medida que se suministra oxigeno la llama se torna amarilla hasta la liberación de humo, por eso la llama ideal es la que no libera humo, y con temperaturas de zona reductora es decir una temperatura entre la llama azul y amarilla, esta herramienta de trabajo es de uso casi indispensable en el laboratorio de microbiología.
Si se ajusta correctamente la entrada de aire por medio del collar, la llama tendrá un cono interior de color azul, no producirá hollín y tendrá el poder calorífico adecuado. También debe graduarse la entrada de combustible para evitar una llama de demasiado tamaño.
Hisopos
Estos aplicadores de madera con un extremo recubierto de algodón son utilizados para la toma de muestra y para la inoculación en medios de cultivo
Asa y aguja de inoculación
Las asas son instrumentos de platino o niquel-cromo insertado en una varilla de aluminio en un mango de ebonita o mango de (Konle) posee una rosca en su extremo inferior, si su extremo libre tiene forma de anillo recibe el nombre de asa, útil para sembrar inoculos en medios de cultivo, si la punta tiene forma recta se usa para sembrar por punción en medios de cultivo en estado solido.
Propipetas
Es un instrumento diseñado para succionar líquidos mediante una bomba de vacio posee 3 válvulas A) Permite la entrada o salida de aire en la pera o bulbo S) para tomar los líquidos y E) Para expulsar los líquidos.
Pinza porta-tubo
Puede ser de madera o metal útil para tomar los tubos de ensayo cuando se someterá a un proceso de calentamiento o para evitar el contacto directo con el tubo de ensayo.
Lupas: Las lupas son un instrumento que permite realizar aumentos de interés para observar características de ciertas colonias bacterianas o de hongos.
El microscopio es un instrumento que permite la observación de los microorganismos existen diferentes tipos como el monocular, binocular, invertido, entre otros como:
Microscopio ultravioleta
Microscopio de fluorescencia
Microscopio de campo oscuro
Microscopio de contrastes de fases
Portapipetas
Son cilindros metálicos que permiten someter a varias pipetas a la esterilización, con una tapa removible que permite tomar con facilidad a las pipetas.
Plancha de calentamiento y agitación
Esta plancha permite el calentamiento del material de vidrio en algunos modelos permite la agitación mediante una barra giratoria de metal que genera una agitación al colocar los imanes de agitación de diferentes formas como píldora, elipses u cruces, en el interior de los envases de vidrio.
La centrifuga
Es un equipo que permite la separación de compuesto de una muestra mediante la fuerza centrifuga, algunas centrifugas pueden controlar la temperatura al aumentarla o disminuirla a punto de congelación la medida de las centrifugas se expresa en revoluciones por minuto (r.p.m.) o gravedad expresada en (g)
Existen otra centrifugas de menor tamaño como las centrifugas para tubos eppendorf útiles para medidas mas pequeñas
Autoclave de Chamberland
Este instrumento es usado para la esterilización por presión y vapor de agua, que se genera para eliminar los microorganismos de medios de cultivo o material de vidrio. Posee unos sellos y manómetros para contener la presión que se mide en libras de presión.
Jarra de anaerobios de Gaspack
Este instrumento consiste en una jarra de forma cilíndrica, plástico transparente, con un atapa que posee nos sellos de goma para un cierre hermético bajo presión generando un ambiente propicio para los cultivos de estudio bajo condiciones de anaerobiosis.
Papel Filtro
Este papel es utilizado para filtrar los medio de cultivo y separar las partículas solidas, en incluso bacterias y virus.
Piceta
Es un embase de plástico útil para almacenar agua alcohol u otros solventes usados en el laboratorio, posee una tapa para su llenado y un pico por donde se expulsa el solvente.
Termómetro
Este un instrumento con una escala graduada para medir la temperatura de los medios o incubadoras de en escalas de grados Celsius o Fahrenheit, ya sea basado en mercurio liquido o electrónico con un electrodo.
Reloj
Este instrumento es muy útil sobre todo para la realización de aquellos métodos que requieren al tiempo como factor de importancia ya sea para llevar registros o preparación de soluciones o tinciones.
Horno
Este equipo sirve para la esterilización en seco por medio de temperaturas hasta de 200 ºC.
Balanza este equipo permite medir cantidades de solutos o solventes para la preparación de compuestos y reactivos en el laboratorio de microbiología en gramos y miligramos.
Balanza analítica este tipo de balanza posee una caja de vidrio con compuertas que evita el contacto directo con el aire ya que este puede causar variación en
el momento de la medición, en que por lo general se pesan cantidades mínimas de miligramos o microgramos.
Nevera o refrigerador
Este equipo permite conservar los medios, reactivos y muestras, mediante bajas temperaturas evitando su deterioro y mayor duración.
Campana de flujo laminar
Este equipo permite la manipulación de muestras evitando su dispersión mediante un flujo laminar de aire dentro de esta campana ya sea de vidrio o poliestireno, en un mesón que permite la visibilidad mediante lámparas de luz visible o luz ultravioleta, con tomas de gas u eléctrica que generen un ambiente para el desarrollo eficaz de trabajo en microbiología
Licuadora
Equipo que permite mezclar y homogenizar soluciones de interés
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