微生物學-實驗

(2019/7/10)(藍忠昱老師) (撰稿:蘇揚迪)

實驗一：微生物分離技術

一、實驗目的：學習將細菌以接種環重於各種培養基上，並學會分離及純化。

二、實驗器材：

1.接種環

2.酒精、酒精燈

3.燒杯、三角玻棒

4.LB培養基、培養液

5.稀釋E.coli菌液

三-1、實驗步驟1-1(劃線法)：

1.以接種環沾取少許大腸桿菌(以下簡稱E.coli)，依下列順序塗抹於LB培養基表面。

2.置入37度培養箱內培養，得單一菌落。

三-2、實驗步驟1-2(懸浮法)：

1.以接種環沾取少許E.coli，置於培養液中，並均勻混合。

2.置於37度震盪培養箱培養，隔天觀察細菌生長情形。

三-2、實驗步驟1-3(塗抹法)：

1.以微量吸管吸取0.1ml之E.coli稀釋菌液，滴於培養基上。

2.取三角玻棒，先置於酒精中，取出後過火使酒精燃盡，待冷卻後將培養基上之菌液均勻抹開。

四、 實驗結果：

實驗二：細菌生長控制

一、實驗目的：得知培養基溫度、紫外光及含氧量等，是否會對細菌生長造成影響。

二、實驗器材：

1.鑷子

2.圓形紙錠

3.化學物質三種及AMP

4.無菌水

三-1、實驗步驟1-1：

1.將E.coli稀釋菌液均勻塗抹於兩個LB培養基內

2.將蓋子打開，分別於陽光下照射5及20分鐘

四-1、 實驗結果1-1：

*殺菌效果：國際標準為1.2cm~1.6cm

三-2、實驗步驟1-2：

1.以簽字筆標示不同化學藥劑於LB培養基表面

2.自E.coli培養液內取0.1ml菌液，均勻塗抹於培養基內

3.將鑷子過火，夾取AMP及其他三張圓型濾紙貼於培養基內

4.分別加入三種化學藥劑及無菌水0.005ml

四-2、 實驗結果1-2：

實驗三：微生物染色

一、實驗目的：學習染色技術，方便觀察目標微生物。

二、實驗器材：

1.E.coli、枯草桿菌、LP33

2.載玻片、蓋玻片、光學顯微鏡

3.接種環、酒精燈

4.鑷子

5.無菌水、鏡油

6.結晶紫、碘液、沙番紅

三、 實驗步驟：

*熱固定法

*簡單染色

1.先使用熱固定法固定E.coli

2.滴1~2滴結晶紫染色10秒

3.使用潤洗瓶衝掉染液並擦乾

實驗結果1-1：

*實驗菌種：E.coli

*負染

*實驗菌種：E.coli

實驗結果1-2：

*革蘭氏染色法

實驗菌種：LP33、E.coli+Bs

實驗結果1-3：

結果討論：

Q1：細胞壁構造如何影響革蘭氏染色結果?

Ans：革蘭氏陽性菌細胞壁層次多且密，使得酒精不易溶出縫隙，因此組隔染液外滲呈紫色。

革蘭氏陰性菌細胞壁較薄且疏，使得細胞壁無法阻擋酒精將染液溶出，因此變為無色。

Q2：革蘭氏染色最重要步驟為何?請說明?

Ans：為第三步->脫色，因為經過此步驟後即可辨別出革蘭氏陽性及陰性菌。

Q3：如何使用洋菜膠培養溫泉菌?

Ans：可使用液體培養基並以水浴槽為熱源培養細菌。

Q4：為何使用酵母菌釀製酒類而不是細菌?

Ans：酵母菌在釀酒過程中可產生特殊風味，而目前酵母菌物種多樣性高，因此風味多樣性也高，使得其在釀酒方面較細菌有優勢。

圖源：

1.https://zhidao.baidu.com/question/130114464.html

2.https://sites.google.com/site/2016nthusummercamp06/microorganism/microorganism2

3.http://www.hopebiol.com/asphtml/refere9582.htm

4.http://www.thebluediamondgallery.com/typewriter/m/microbiology.html

5.https://pixabay.com/images/search/leonardo%20da%20vinci/