微生物學專題

微生物簡介

微生物分為五類，分別為細菌、原生生物、藻類、病毒及真菌。雖然病毒並非生物，但因其極微小的特性，仍暫將其放入微生物的行列。目前微生物的最大可至1毫米，最小甚至只有200奈米。由於我們人類對微生物的理解甚少，已知的微生物大約是全部的百分之一，微生物仍有許多值得我們深究、研析之處。環境惡劣之處便可能藏有未知的微生物，因此能觸發我們的冒險精神，嘗試尋找未知的微生物。除此，微生物也與我們的健康息息相關。即使我們對細菌無好印象，但其實約80%的細菌對我們無害，且益生菌更是對身體有幫助。不僅如此，連眾所皆知的抗生素也是由微生物製造。微生物與我們密不可分，所以加入我們的實驗，進一步認識微生物吧！

菌落懸浮法 塗抹法 分區劃線法

（共64個菌落） (共4個菌落)

實驗二:細菌生長控制

步驟:

1. 共有三盤培養基，兩盤分別比較照射UV五分鐘與十分鐘後細菌的生長狀況；另一盤則是用以比較不同化學成分對細菌生長的影響。

2. 首先以三角玻棒均勻的塗抹稀釋後的0.1ml菌液於兩個培養基中，分別標示為照射UV五分鐘與照射UV十分鐘

3. 將未稀釋菌液0.1ml以三角玻棒均勻塗抹於培養基中

4. 聶子過火以後， 夾取五個圓形濾紙，等距貼於培養基中，以簽字筆分別標示將要加入的五種化學物質，以方便觀察。

(註:五種化學物質為Kanamycin，蒜頭萃取液，漱口水，漂白水，對照組:無菌水)

5. 將各菌盤正放，以避免紙錠掉落，至於37度隔夜培養

6. 觀察各個化學物質抑制細菌生長的情形，測量抑制圈的直徑並且記錄。

實驗結果：

0分鐘 5分鐘 10分鐘

由上圖可知，照射UV五分鐘後細菌便難以生長。

由上圖可知，抗生素與蒜頭水有明顯的功效，漂白水僅有些許效力，而漱口水和無菌水沒有抑制細菌生長的效果。

目的:

微生物體型很小，不易觀察且多為透明無色。故須經染色處理，才容易藉由顯微鏡觀察。

原理:

微生物染色方法主要可藉由目的不同主要分為兩大類:簡單染色與鑑別染色，分述如下

1.簡單染色 : 只使用一種染料，主要分辨細菌外型、排列、成分。另外一種活體染色主要用來排別細菌是否為活菌。

2.鑑別染色 : 用多種染料，主要用來區別細胞間或是細胞某部位之差異，可用於維生物分類或細胞構造上的觀察。

方法:

本次實驗主要有簡單染色(Simple staining) 、負染色(Negative staining)、革蘭氏染色(Gram's staining)

菌種:

• 大腸桿菌(E. coli)
• 金黃葡萄球菌(S.A)

設備:

1. 載玻片
2. 光學顯微鏡
3. 酒精燈
4. 鑷子

*熱固定法:

在乾淨玻片中央滴5μL無菌水，再用tip沾菌落並與無菌水混合，接著在酒精等上加熱至沒有無菌水，這樣可以將微生物固定於在玻片上。

簡單染色:

• 使用熱固定法
• 使用Crystal violet染劑滴2-3滴於玻片上，靜置1分鐘
• 用蒸餾水沖洗，注意不要沖到菌種

40倍 100倍

負染色法:

• 取Nigrosin染劑於載玻片邊緣，用tip勾E. coli菌體至於染劑中均勻混合。
• 用另一個乾淨玻片，將染劑與菌種混合液推平，始樣品由濃漸淡。

40倍 100倍

革蘭氏染色:

• 將E.coli 與 S.A 用熱固定法固定

1. 以Crystal violet染劑染一分鐘，再洗淨
2. 滴入Mordant作用一分鐘，並洗淨
3. 用95%酒精進行脫色作用，傾斜玻片讓酒精滑過菌落，直到酒精為透明無色。
4. 最後用Safranin，繼續作用3分鐘

原理:

• 革蘭氏陽性菌與陰性菌最大的差別是在細胞壁的厚薄
• 革蘭氏陽性菌:有較厚的細胞壁，故可以和Crystal violet與Mordant的結晶複合體結合。
• 革蘭氏陰性菌:較薄的細胞壁且有細胞外膜，無法和Crystal violet與Mordant的結晶複合體結合，所以會被酒精洗掉
• 用95%酒精進行脫色作用為最重要的步驟，此可以區分陰性或陽性，因為對於Crystal violet與Mordant的結晶複合體有不同的作用，之後用Safranin染色能夠使陰性菌也有顏色

結論:

• 陽性菌會呈現藍紫色
• 陰性菌會呈現紅色

革蘭氏 S.A(陽性) 革蘭氏 S.A(陽性) 革蘭氏 E. coli(陰性) 革蘭氏 混合