Infecção de sementes com F. oxysporum 

Para obter sementes contaminadas com F. oxysporum (isolado xxx), o patógeno será cultivado em placa de Petri (9 cm) contendo meio Batata Dextrose Ágar (BDA) por 5 dias a 25ºC e fotoperíodo de 12 h. Em seguida, sementes desinfestadas de feijoeiro do tipo carioca serão colocadas sobre as colônias e incubadas nas mesmas condições por mais 24 h, no total de 20 sementes/placa de Petri.

Patogenicidade de F. oxysporum em sementes de feijoeiro

Sementes de feijoeiro do tipo carioca, após serem contaminadas por F. oxysporum (isolado xxx), serão distribuídas em camadas de papel germitest (44,0 x 34,0 cm) e umedecidas com água destilada esterilizada (ADE), de acordo com as Regras para Análise de Sementes (2009). Rolos de papel germitest contendo as sementes serão mantidos em BOD a 20ºC, 98% de umidade relativa e ausência de luz durante 7 dias. Em seguida, as sementes serão observadas quanto à presença de micélio aéreo de F. oxysporum ao redor das sementes e plântulas infectadas para mensurar a incidência do patógeno (CARVALHO et al., 2014). Monofiálides, microconídios e macroconídios típicos de F. oxysporum, também serão observados usando um microscópio estereoscópico Edutec NSA 028482 (LESLIE & SUMMERELL, 2006; REGRAS PARA ANÁLISE DE SEMENTES, 2009). Para confirmar a espécie, lâminas semipermanentes serão preparadas com o material biológico para exame em microscópio de luz Leica DM500, câmera digital ICC50, software LAS EZ. Além disso, será mensurado o número de plântulas normais, plântulas anormais (raiz primária com rachaduras, danificadas ou ausentes; raízes secundárias pouco desenvolvidas; hipocótilo curto e grosso, torcido e curvado, com fendas profundas; epicótilo sem folhas primordiais; cotilédone com dano no broto terminal ou com necrose no ponto de união com a plúmula; necroses nos tecidos com presença de patógeno) e sementes mortas, de acordo com as REGRAS PARA ANÁLISE DE SEMENTES (2009). Além disso, também serão mensurados o comprimento de raiz (CR), da parte aérea (CPA) e comprimento total (CT) de cada plântula considerada normal; além da obtenção da massa fresca da raiz (MFR), massa fresca da parte aérea (MFPA) e massa fresca total (MFT), massa seca da raiz (MSR), massa seca da parte aérea (MSPA) e massa seca total (MST) (massa seca: secagem por 24 horas em estufa a 65°C) (VAZ et al., 2023) . Serão quatro repetições de 50 sementes para cada isolado de fitopatógeno em delineamento em blocos casualizados (DBC). Sementes desinfestadas e não contaminadas serão usadas como controle negativo.

Análises estatísticas

Os resultados serão submetidos ao teste de Kolmogorov-Smirnov para verificar a normalidade dos dados e, posteriormente, os resultados relativos a incidência de F. oxysporum nas sementes, porcentagem de plântulas normais, plântulas anormais, sementes mortas, CR, CPA, CT, MFR, MFPA, MFT, MSR, MSPA e MST serão submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao teste de Scott-Knott (P<0,05) para verificar se há diferença entre os isolados avaliados. Todas as análises serão realizadas com auxílio do programa SISVAR 5.3 (FERREIRA, 2011).

Referências

CARVALHO, D.D.C.; LOBO JUNIOR, M.; MARTINS, I.; INGLIS, P.W.; MELLO, S.C.M. Biological control of Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli by Trichoderma harzianum and its use for common bean seed treatment. Tropical Plant Pathology, 39(5), 384-391, 2014. https://doi.org/10.1590/S1982-56762014000500005

FERREIRA, D.F. Sisvar: a computer statistical analysis system. Ciência e agrotecnologia, 35, 1039-1042, 2011. https://doi.org/10.1590/S1413-70542011000600001

LESLIE, J.F.; SUMMERELL, B.A. The Fusarium Laboratory Manual. Ames, IA, USA: Blackwell Professional Publishing. 2006, 388p.

REGRAS PARA ANÁLISE DE SEMENTES. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Secretaria de Defesa Agropecuária. Brasília: Mapa/ACS, 2009. 399p.

VAZ, T.M.; BARBOZA, M.E.S.; OLIVEIRA, A.M.E.; OLIVEIRA, T.A.S.; DUARTE, E.A.A.; RODRIGUES, F.; CARVALHO, D.D.C. Controle biológico e caracterização fisiológica de Sclerotinia sclerotiorum provenientes de plantas de soja cv. ‘soytech 797 ipro’. Observatório de la economía latinoamericana, 21(11), 23392-23405, 2023. https://doi.org/10.55905/oelv21n11-260