Работен пакет 3

Трансформиране на бактериалните патогени с флуоресцентен индикатор

Флуоресциращите протеини са уникален инструмент за изследване на биологичните процеси в in vivo условия. В настоящия проект селектираните за приложение върху растенията бактериални щамове ще бъдат трансформирани с ген кодиращ постоянна експресия на флуоресцентен протеин (flprot). Трасформираният flprot фитопатоген ще бъде тестван за степен на патогенност спрямо растенията и чувствителност към съответния бактериофаг. Ще бъде подбрана линия, която не се отличава по тези характеристики от изходния щам. Тази линия ще се използва при всички експерименти от Работни пакети 4 и 5. Flprot трансформираните бактерии позволят визуализиране на инфекцията, отчитане на степента на контаминация на растенията с патогена, както и лесно проследяване на резултата от третиране с бактериофага и другите фитоефектори.

3.1. Селекция на подходящи гени за флуоресцентен индикатор и вектор за трансформация, приготвяне на конструкт;

3.2. Подбор на чувствителни за трансформация фитопатогени според степента на образуване на екзополизахарид (ЕПЗ);

3.3. Оптимизиране на хранителната среда за култивиране на потенциалните трансформанти с оглед по-ниска продукция на ЕПЗ;

3.4. Трансформация на селекционираните фитопатогени с ген, кодиращ постоянна експресия на флуоресцентен протеин (flprot);

3.5. Изпитване на flprot линии за степен на патогенност спрямо растенията и чувствителност спрямо фагите. Подбор на фаги подходящи за заразяване на растенията.

Отговорник: д-р Золтан Уршев