Работен пакет 1

Микробиологичен подбор на бактерии и бактериофаги. Поддържане и намножаване на микроорганизмите. Разработване на метод за количествено определяне на фаговата ДНК

В колекцията на Катедра „Обща и промишлена микробиология“ се съхраняват много изолати на бактериални патогени по растенията. Всички щамове са охарактеризирани и идентифицирани с различни методи. При предварителни експерименти са търсени бактериофаги атакуващи изолираните в България щамове на Pseudomonas syringae, Xantnomonas vesicatoria и Xanthomonas euvesicatoria. Досега са открити няколко фаги с литична активност. Така установените двойки чувствителен щам фитопатоген-бактериофаг ще бъдат предоставени за in vivo приложение върху растенията. В хода на проекта работните микроорганизми ще бъдат поддържани и култивирани за целта на проучването. За оптимизиране на компонентите на изследваните патосистеми е от ключово значение концентрацията на селектираните фаги. Затова ще бъде разработен qPCR метод за качествен и количествен контрол на фагите в растенията.

1.1. Подбор на видово и популационно разнообразни фитопатогени:

1.1.1. Определяне на критериите за подбор на фитопатогените (степен на резистентност, патотип, раса, култивационни характеристики, продукция на полизахарид, степен на патогенност и устойчивост на вирулентността);

1.1.2. Характеризиране на селекционираните фитопатогени чрез култивационни и инфилтрационни методи;

1.1.3. Оптимизиране на състава на хранителните среди за култивиране и поддържане на фитопатогенните щамове;

1.2. Подбор на видово – специфични бактериофаги:

1.2.1. Определяне на критериите за подбор на видово-специфични бактериофаги (литична способност, бързина на възпроизводство на фага, устойчива жизнеспособност, толерантност към медни бактерициди, степен на видова специфичност);

1.2.2. Оптимизиране на състава на хранителните среди за култивиране на бактериофаги;

1.2.3. Разработване на метод за количествено определяне на фаги чрез qPCR метод.

Отговорник: гл. ас. д-р Йоана Кижева