Selamat datang di dunia mikologi, sebuah cabang ilmu biologi yang khusus mempelajari jamur, termasuk ragi (yeast) dan kapang (molds). Jamur adalah makhluk hidup unik yang berbeda dari tumbuhan maupun hewan; mereka adalah organisme eukariotik yang memiliki membran inti sel dan mitokondria, namun tidak memiliki klorofil sehingga tidak bisa berfotosintesis.

Untuk memahami jamur dengan mudah, kita bisa melihatnya dari dua sisi utama:

1. Peran Penting di Alam dan Industri

Di alam bebas, jamur bertindak sebagai pahlawan daur ulang atau saprofit. Mereka mengeluarkan enzim kuat untuk mengurai materi organik mati, seperti kayu atau daun gugur, dan mengubahnya menjadi nutrisi yang menyuburkan tanah. Dalam kehidupan sehari-hari, kita sangat bergantung pada jamur:

• Makanan dan Minuman: Ragi Saccharomyces cerevisiae digunakan untuk mengembangkan roti serta membuat bir dan anggur melalui proses fermentasi. Beberapa jamur juga digunakan untuk membuat keju seperti Roquefort atau Camembert.

• Kesehatan: Jamur merupakan sumber antibiotik pertama yang ditemukan manusia, yaitu penisilin, yang diproduksi oleh jamur Penicillium.

2. Sisi Klinis dan Penyakit

Meskipun banyak yang bermanfaat, sebagian kecil jamur dapat menyebabkan penyakit pada manusia yang disebut mikosis. Secara klinis, jamur penyebab penyakit dibagi berdasarkan lokasi infeksinya:

• Mikosis Superfisial: Infeksi ringan pada jaringan luar seperti kulit, rambut, dan kuku, contohnya kutu air dan kurap.

• Mikosis Sistemik: Infeksi serius yang menyerang organ dalam, biasanya terjadi karena menghirup spora jamur dari lingkungan.

• Mikosis Oportunistik: Infeksi yang menyerang orang dengan sistem imun lemah (seperti penderita kanker atau AIDS). Jamur seperti Candida albicans yang normalnya ada di tubuh kita bisa berubah menjadi berbahaya dalam kondisi ini.

Bagaimana Kita Mengenali Mereka?

Secara morfologi, jamur muncul dalam dua bentuk dasar: yeast yang berbentuk sel tunggal mikroskopis dan bereproduksi dengan bertunas (budding), serta molds yang multiseluler dan membentuk jalinan benang-benang halus yang disebut hifa. Beberapa jamur spesial bahkan bersifat dimorfik, artinya mereka bisa berubah bentuk dari kapang menjadi ragi tergantung pada suhu lingkungannya.

Itulah gambaran umum tentang mikologi. Jamur adalah organisme yang menjaga keseimbangan alam sekaligus menjadi tantangan di dunia medis.

Fungi (jamur) dalam konteks klinis adalah mikroorganisme eukariotik non-fotosintetik yang bertindak sebagai heterotrof absorptif, artinya mereka menyerap nutrisi yang telah dicerna oleh enzim ekstraseluler yang mereka sekresikan. Penyakit yang disebabkan oleh jamur dikenal sebagai mikosis.

Secara klinis, jamur dibagi menjadi dua kelompok utama berdasarkan penampilannya: yeast (ragi) yang bersifat uniseluler dan molds (kapang) yang bersifat multiseluler dengan filamen bernama hifa yang membentuk anyaman miselium. Beberapa jamur bersifat dimorfik, artinya mereka bisa berubah bentuk antara ragi dan kapang tergantung pada kondisi lingkungan, seperti suhu.

Klasifikasi Penyakit Jamur (Mikosis)

Penyakit jamur diklasifikasikan ke dalam empat pola klinis utama:

• Mikosis Superfisial: Infeksi pada struktur epitel permukaan seperti kulit, rambut, dan kuku. Contoh utamanya adalah dermatofitosis (seperti kurap atau ringworm dan kutu air) yang disebabkan oleh genus Trichophyton, Microsporum, dan Epidermophyton.

• Mikosis Subkutan: Infeksi yang berkembang di lokasi inokulasi, seringkali setelah trauma kulit, seperti sporotrikosis.

• Mikosis Sistemik: Infeksi pada organ dalam yang biasanya didapat melalui inhalasi spora ke saluran pernapasan. Contohnya termasuk histoplasmosis dan koksidioidomikosis.

• Mikosis Oportunistik: Terjadi pada inang yang sistem imunnya lemah (misalnya pasien AIDS atau kanker). Jamur seperti Candida, Aspergillus, dan Cryptococcus sering menjadi penyebab utama.

Patogen Jamur yang Signifikan secara Klinis

• Candida albicans: Merupakan flora normal pada mulut, usus, dan saluran urogenital. Jamur ini bisa memicu infeksi oportunistik seperti sariawan (thrush), infeksi vagina, hingga kandidiasis invasif yang mematikan di aliran darah jika pertahanan tubuh terganggu.

• Cryptococcus neoformans: Jamur ragi berkapsul yang sering ditemukan di tanah yang tercemar kotoran burung. Infeksi biasanya dimulai di paru-paru dan dapat menyebar ke sistem saraf pusat, menyebabkan meningitis, terutama pada pasien imunokompromis.

• Aspergillus fumigatus: Jamur kapang yang umum di lingkungan. Pada individu yang rentan, spora yang terhirup dapat menyebabkan "bola jamur" di paru-paru atau pneumonia nekrotikans yang invasif

Jamur secara umum dapat dibedakan menjadi dua kelompok berdasarkan perannya terhadap inang, yaitu jamur kontaminan dan jamur patogen.

Jamur Kontaminan (Saprofita)

Jamur ini umumnya bersifat saprobik, artinya mereka memperoleh nutrisi dengan mengurai bahan organik yang sudah mati di lingkungan.

• Karakteristik: Sering ditemukan di tanah, air, dan udara dalam jumlah melimpah. Mereka memiliki peran penting sebagai pendaur ulang unsur kimia seperti karbon dan nitrogen di alam.

• Dampak: Sering kali dianggap sebagai organisme pengganggu karena merusak makanan (seperti buah dan sayuran) atau mengontaminasi kultur laboratorium.

• Contoh: Rhizopus stolonifer (kapang roti hitam), Mucor, dan beberapa spesies Penicillium.

Jamur Patogen

Jamur ini memiliki kemampuan untuk menyebabkan penyakit pada manusia yang dikenal sebagai mikosis. Jamur patogen dikategorikan menjadi:

1. Patogen Primer: Dapat menginfeksi dan menyebabkan penyakit pada individu yang sehat tanpa adanya faktor pemicu khusus. Contohnya adalah dermatofita (penyebab kurap dan kutu air) yang menginvasi jaringan keratin seperti kulit, rambut, dan kuku.

2. Patogen Oportunistik: Jamur dengan patogenisitas rendah yang hanya menyerang inang ketika sistem pertahanan tubuhnya sedang lemah (imunokompromis), misalnya pada pasien AIDS, kanker, atau pengguna obat imunosupresan.

   • Contoh utama: Candida albicans (penyebab sariawan/thrush dan infeksi vagina) serta Cryptococcus neoformans (penyebab meningitis).

Morfologi Klinis

Secara klinis, baik jamur kontaminan maupun patogen dapat muncul dalam dua bentuk morfologi utama:

• Yeast (Ragi): Sel uniseluler mikroskopis yang biasanya bereproduksi dengan cara bertunas (budding).

• Molds (Kapang): Organisme multiseluler yang membentuk filamen bernama hifa yang saling jalin-menjalin membentuk massa yang disebut miselium.

• Dimorfik: Beberapa jamur patogen bersifat dimorfik, yaitu dapat berubah bentuk dari fase kapang di lingkungan (suhu rendah) menjadi fase ragi di dalam jaringan tubuh (suhu 37°C)

Antifungal (Agen Antijamur)

Karena jamur adalah organisme eukariotik, mereka memiliki banyak kesamaan struktur dengan sel manusia, sehingga sulit untuk menemukan target obat yang tidak beracun bagi inang. Agen antijamur bekerja dengan menargetkan komponen spesifik jamur:

• Membran Sel (Ergosterol): Ini adalah target yang paling umum. Jamur menggunakan ergosterol untuk integritas membran, sedangkan manusia menggunakan kolesterol.

  • Poliena (seperti Amphotericin B dan Nystatin): Mengikat ergosterol dan membentuk pori-pori di membran, menyebabkan kebocoran isi sel.

  • Azoles (seperti Miconazole dan Ketoconazole): Menghambat enzim yang mensintesis ergosterol.

• Fungsi Asam Nukleat: 5-flucytosine (5-FC) bekerja dengan meniru basa nukleotida untuk mengganggu replikasi DNA dan sintesis protein jamur. Toksisitas selektifnya terjadi karena sebagian besar jamur secara aktif mengangkut 5-FC ke dalam sel mereka, sementara sel manusia tidak bisa melakukannya.

Mikotoksin dan Toksisitas

Mikotoksin adalah racun yang disekresikan oleh jamur yang mengkontaminasi makanan. Kondisi penyakit akibat menelan racun ini disebut mikotoksikosis.

Beberapa contoh mikotoksin dan toksisitasnya meliputi:

• Aflatoksin: Dihasilkan oleh spesies Aspergillus (sering ditemukan pada kacang tanah dan biji-bijian). Senyawa ini merupakan karsinogen kuat yang terkait erat dengan perkembangan kanker hati.

• Ergot Alkaloid: Diproduksi oleh jamur Claviceps purpurea pada biji-bijian sereal. Racun ini dapat menyebabkan halusinasi, kejang, bahkan kematian (dikenal sebagai "St. Anthony’s fire").

• Mycetism: Keracunan akibat memakan jamur liar yang beracun, seperti genus Amanita, yang mengandung toksin sangat kuat dan mematikan.

• Hipersensitivitas: Menghirup spora jamur tertentu (seperti Aspergillus) juga dapat memicu reaksi alergi berat pada sistem pernapasan, mirip dengan gejala asma

Proses isolasi dan identifikasi jamur dalam konteks klinis dilakukan berdasarkan klasifikasi penyakit (mikosis) dan karakteristik morfologi jamur tersebut. Berikut adalah penjelasan lengkapnya:

1. Isolasi dan Identifikasi Jamur Penyebab Mikosis Superfisial

Mikosis superfisial menyerang jaringan berkeratin seperti kulit, rambut, dan kuku, yang utamanya disebabkan oleh kelompok dermatofita (genus Trichophyton, Microsporum, dan Epidermophyton).

• Isolasi:

  • Sampel Klinis: Diambil dari kerokan kulit, potongan kuku, atau rambut yang terinfeksi.

  • Media: Spesimen diinokulasi ke dalam Sabouraud Dextrose Agar (SDA). Media ini memiliki pH asam (sekitar 5.6) yang mendukung pertumbuhan jamur namun menghambat sebagian besar bakteri. Seringkali ditambahkan antibiotik seperti kloramfenikol untuk lebih menekan pertumbuhan bakteri kontaminan.

  • Inkubasi: Dilakukan pada suhu ruang (25°C) karena dermatofita terhambat pertumbuhannya pada suhu 37°C.

• Identifikasi:

  • Pemeriksaan Langsung: Menggunakan preparat KOH 10% pada sampel jaringan untuk melarutkan keratin sehingga hifa dan spora jamur terlihat jelas di bawah mikroskop.

  • Lampu Wood: Infeksi rambut oleh Microsporum akan menunjukkan pendaran cahaya (fluoresensi) saat disinari cahaya ultraviolet.

  • Morfologi Mikroskopis: Menggunakan pewarnaan Lactophenol Cotton Blue (LPCB) untuk melihat struktur reproduksi. Microsporum ditandai dengan makrokonidia berdinding tebal dan kasar. Epidermophyton memiliki makrokonidia berbentuk gada yang halus. Trichophyton memiliki mikrokonidia yang melimpah.

2. Isolasi dan Identifikasi Jamur Penyebab Mikosis Intermediate (Subkutan)

Mikosis subkutan terjadi akibat inokulasi jamur ke dalam jaringan di bawah kulit melalui trauma, seperti pada kasus sporotrikosis (Sporothrix schenckii) atau misetoma (Madurella).

• Isolasi:

  • Sampel Klinis: Cairan dari lesi, nanah yang diaspirasi dari nodul, atau biopsi jaringan.

  • Media: SDA atau media diperkaya lainnya.

• Identifikasi:

  • Dimorfisme: Sporothrix schenckii adalah jamur dimorfik yang berubah bentuk dari fase kapang di lingkungan (25°C) menjadi fase ragi di dalam jaringan tubuh (37°C). Identifikasi dipastikan dengan mengubah fase kapang menjadi fase ragi di laboratorium.

  • Mikroskopis: Pada fase ragi, sel tampak berbentuk oval atau menyerupai cerutu (cigar-shaped). Pewarnaan Gram terkadang efektif untuk mendeteksi Sporothrix dalam spesimen klinis.

3. Isolasi dan Identifikasi Jamur Penyebab Mikosis Sistemik

Mikosis sistemik melibatkan organ dalam dan biasanya didapat melalui inhalasi spora. Contoh utamanya adalah Histoplasma capsulatum, Coccidioides immitis, dan Blastomyces dermatitidis.

• Isolasi:

  • Sampel Klinis: Sputum, cairan serebrospinal, sumsum tulang, atau biopsi jaringan organ dalam.

  • Media: Media diperkaya seperti Brain Heart Infusion Agar atau SDA.

  • Keamanan: Jamur sistemik seperti Coccidioides sangat infeksius di laboratorium, sehingga penanganan kultur harus dilakukan dengan sangat hati-hati di bawah fasilitas biosafety yang tepat.

• Identifikasi:

  • Dimorfisme Termal: Merupakan ciri khas utama. Histoplasma pada suhu ruang membentuk hifa dengan makrokonidia tuberkulat (bertonjolan) yang khas, namun berubah menjadi ragi kecil di dalam makrofag inang.

  • Pemeriksaan Histopatologi: Deteksi struktur ragi atau spherule (pada Coccidioides) di dalam potongan jaringan biopsy menggunakan pewarnaan khusus seperti methenamine silver.

  • Uji Cepat (untuk Candida): Sebagai penyebab sistemik oportunistik, Candida albicans dapat diidentifikasi dalam 2 jam melalui uji germ tube, di mana sel ragi akan menumbuhkan struktur menyerupai kecambah saat diinkubasi dalam serum kuda.

Prosedur diagnosis jamur memerlukan ketelitian karena pertumbuhannya yang lebih lambat dibandingkan bakteri

Pemeriksaan molekuler dalam mikologi klinis merupakan metode yang menggunakan analisis materi genetik untuk mengidentifikasi jamur patogen. Teknik ini telah menjadi sangat penting karena metode tradisional yang mengandalkan morfologi dan karakteristik biokimia sering kali memakan waktu lama atau memberikan hasil yang bervariasi.

Berikut adalah beberapa metode utama pemeriksaan molekuler dalam mikologi:

• PCR (Polymerase Chain Reaction): Teknik ini menyalin atau menggandakan fragmen DNA spesifik dari jamur patogen secara eksponensial, sehingga satu molekul DNA dapat diperbanyak menjadi miliaran salinan dalam hitungan jam. Proses PCR melibatkan siklus suhu otomatis dalam thermocycler yang mencakup denaturasi (pemisahan untai DNA pada suhu tinggi), penempelan/annealing (penempelan primer ke urutan DNA target), dan ekstensi (sintesis DNA baru oleh enzim polimerase seperti Taq). PCR sangat sensitif dan memungkinkan deteksi jamur meskipun jumlahnya dalam sampel pasien sangat sedikit.

• Probe Asam Nukleat (Uji Hibridisasi): Metode ini menggunakan untai tunggal asam nukleat yang sudah diketahui (probe) untuk mencari untai komplementer (target) dari jamur yang ingin diidentifikasi dalam sampel klinis. Jika terjadi pengikatan atau hibridisasi antara probe dan target, maka identitas organisme tersebut terkonfirmasi. Probe yang diarahkan pada RNA ribosom (rRNA) dianggap lebih sensitif karena sel jamur mengandung ribuan salinan urutan rRNA, dibandingkan dengan hanya satu atau dua salinan target DNA.

• Sekuensing DNA: Teknik ini menentukan urutan pasti nukleotida dalam gen jamur. Metode yang umum digunakan adalah metode dideoksi Sanger, yang melibatkan sintesis untai DNA komplementer secara in vitro untuk memetakan urutan basa. Analisis genetik terhadap rRNA (seperti 18S rRNA pada fungi) sering digunakan dalam skema evolusi dan filogenetik untuk menentukan hubungan kekerabatan dan klasifikasi taksonomi jamur yang lebih akurat daripada sekadar fitur fisik.

• MALDI-TOF Mass Spectrometry: Meskipun secara teknis menganalisis profil protein, teknik molekuler modern ini memberikan identifikasi cepat (kurang dari satu jam) dengan menganalisis rasio ukuran terhadap muatan dari molekul-molekul kunci organisme. Teknik ini kini menjadi alternatif atau tambahan penting bagi skema identifikasi biokimia dan genomik di laboratorium klinis.

Pemeriksaan molekuler sangat berharga karena mampu mengidentifikasi jamur yang sulit atau lambat ditumbuhkan dalam biakan laboratorium, seperti pada kasus Coccidioides immitis atau Blastomyces dermatitidis. Selain itu, teknik ini dapat memberikan diagnosis cepat yang krusial untuk memulai terapi antijamur tepat waktu pada infeksi yang mengancam jiwa

Hasil pemeriksaan mikologi sangat bergantung pada ketepatan prosedur dari tahap pengambilan sampel hingga interpretasi di laboratorium. Berikut adalah faktor-faktor utamanya:

1. Kualitas dan Pengambilan Spesimen

• Lokasi Infeksi: Sampel harus diambil langsung dari lokasi infeksi yang aktif.

• Kontaminasi: Paparan terhadap flora normal tubuh atau mikroorganisme lingkungan (seperti spora di udara) dapat menutupi keberadaan patogen asli dan menyebabkan kesalahan identifikasi.

• Alat Pengambil: Penggunaan swab kayu terkadang dihindari karena dapat mengandung toksin yang menghambat pertumbuhan jamur; swab plastik atau dacron lebih disarankan.

2. Transportasi Spesimen

• Waktu: Spesimen harus segera dikirim ke laboratorium (idealnya <2 jam) karena penundaan dapat menurunkan viabilitas jamur atau memungkinkan kontaminan tumbuh berlebih.

• Kondisi Lingkungan: Suhu ekstrem selama pengiriman dapat merusak sel jamur yang sensitif.

3. Media Kultur dan Nutrisi

• Selektivitas Media: Jamur membutuhkan nutrisi spesifik (karbohidrat tinggi) dan lingkungan asam. Media standar seperti Sabouraud Dextrose Agar (SDA) memiliki pH rendah (sekitar 5.0-5.6) yang mendukung jamur tetapi menghambat bakteri.

• Ketebalan Agar: Pada uji sensitivitas, kedalaman agar (standar 4 mm) mempengaruhi tingkat difusi obat antijamur; agar yang terlalu tebal menghasilkan zona hambat yang lebih kecil.

4. Kondisi Inkubasi

• Suhu: Jamur patogen umumnya tumbuh optimal pada suhu tubuh (37°C), sedangkan jamur saprofit lebih menyukai suhu ruang (25°C). Perubahan suhu yang mendadak bisa bersifat letal.

• Waktu: Jamur tumbuh jauh lebih lambat dibandingkan bakteri, membutuhkan waktu beberapa hari hingga berminggu-minggu untuk membentuk koloni yang terlihat.

• Kelembapan dan Oksigen: Jamur membutuhkan atmosfer yang lembap untuk mencegah dehidrasi media. Sebagian besar bersifat aerobik, sehingga sirkulasi udara yang cukup diperlukan.

5. Teknik Laboratorium dan Identifikasi

• Teknik Aseptik: Kegagalan menjaga sterilitas alat dan area kerja akan menghasilkan pertumbuhan kontaminan yang menyesatkan.

• Pemeriksaan Mikroskopis:

  • Penggunaan KOH 10% sangat penting untuk melarutkan keratin dan debris jaringan agar struktur jamur terlihat jelas.

  • Fiksasi Panas: Pemanasan berlebih saat menyiapkan preparat dapat merusak morfologi halus jamur.

• Kondisi Inang: Status imun pasien (seperti penderita AIDS) mempengaruhi jenis jamur yang ditemukan, di mana jamur oportunistik yang biasanya tidak berbahaya bisa menjadi penyebab utama infeksi.

Penerapan jaminan mutu (Quality Assurance/QA) pada pemeriksaan mikologi sangat krusial karena jamur memiliki karakteristik pertumbuhan yang berbeda dari bakteri, seperti laju pertumbuhan yang lambat dan risiko kontaminasi spora yang tinggi.

Berikut adalah komponen utama dalam menerapkan jaminan mutu di laboratorium mikologi:

1. Tahap Pra-Analitik: Kualitas Spesimen

Keberhasilan identifikasi sangat bergantung pada pengambilan dan transportasi sampel yang tepat.

• Pengambilan Sampel: Spesimen harus diambil dari lokasi infeksi yang aktif (seperti kerokan kulit, kuku, atau biopsi jaringan) menggunakan alat steril.

• Transportasi: Sampel harus segera dikirim ke laboratorium, idealnya dalam waktu kurang dari 2 jam. Penundaan lebih dari 24 jam dapat membuat sampel tidak layak pakai karena pertumbuhan kontaminan atau penurunan viabilitas patogen.

• Labeling: Setiap kontainer harus diberi label lengkap (nama pasien, ID, lokasi pengambilan, serta tanggal dan waktu koleksi) untuk mencegah kesalahan tertukarnya sampel.

2. Tahap Analitik: Validasi Prosedur dan Media

Jaminan mutu pada tahap ini memastikan bahwa proses laboratorium dilakukan secara standar.

• Teknik Aseptik dan Kontenmen: Prosedur harus dilakukan dengan teknik aseptik yang ketat untuk mencegah autoinfeksi pada teknisi dan kontaminasi pada kultur. Manipulasi kultur jamur harus dilakukan dengan cepat dan efisien untuk mencegah penyebaran spora reproduktif ke lingkungan laboratorium.

• Standarisasi Media: Penggunaan media selektif seperti Sabouraud Dextrose Agar (SDA) adalah standar utama karena pH rendahnya (4.5–5.6) mendukung pertumbuhan jamur sekaligus menghambat bakteri. Ketebalan agar juga harus dijaga (misalnya standar 4 mm untuk uji sensitivitas) karena kedalaman medium memengaruhi tingkat difusi agen antijamur.

• Kondisi Inkubasi: Suhu inkubasi umumnya dijaga pada 25°C untuk jamur saprofit dan molds. Ruang inkubasi harus dijaga kelembapannya untuk mencegah dehidrasi media agar, terutama karena jamur membutuhkan waktu hari hingga minggu untuk tumbuh.

3. Kontrol Kualitas Alat dan Reagen

• Validasi Sterilisasi: Efektivitas autoklaf harus dipantau secara berkala menggunakan kontrol biologis, seperti spora Bacillus stearothermophilus, untuk memastikan seluruh alat dan media benar-benar steril.

• Kalibrasi Mikroskop: Lensa mikroskop harus dibersihkan secara rutin dengan kertas lensa kering dan dilakukan kalibrasi mikrometer okuler jika diperlukan pengukuran dimensi sel untuk identifikasi spesies.

• Kontrol Positif dan Negatif: Dalam setiap pengujian (seperti pewarnaan Gram atau uji biokimia), harus disertakan slide kontrol dengan organisme yang sudah diketahui hasilnya untuk memastikan reagen bekerja dengan benar.

4. Tahap Post-Analitik: Dokumentasi dan Pelaporan

• Pencatatan Data: Semua data pengamatan, baik makroskopis (morfologi koloni) maupun mikroskopis (struktur hifa dan spora), harus dicatat dengan teliti dalam laporan laboratorium.

• Identifikasi Definitif: Penggunaan teknik molekuler seperti probe DNA atau sekuensing rRNA dapat digunakan sebagai standar emas untuk memverifikasi hasil identifikasi tradisional yang terkadang subjektif

Melakukan verifikasi dan validasi hasil pemeriksaan mikologi adalah langkah kritis untuk memastikan akurasi diagnosis sebelum dilaporkan kepada klinisi. Proses ini mencakup pemastian bahwa prosedur dilakukan dengan benar dan hasil yang diperoleh konsisten dengan karakteristik biologis jamur yang dicurigai.

Berikut adalah penjelasan lengkap mengenai tahapan verifikasi dan validasi tersebut:

1. Verifikasi Pra-Analitik dan Proses (Aseptisitas)

• Teknik Aseptik: Verifikasi dimulai dengan memastikan kepatuhan terhadap teknik aseptik yang ketat untuk mencegah kontaminasi kultur oleh mikroorganisme lingkungan atau flora normal. Kontaminasi dapat menghasilkan hasil positif palsu yang menyesatkan identifikasi.

• Keamanan Laboratorium: Dalam mikologi, manipulasi kultur jamur harus dilakukan dengan cepat dan efisien untuk mencegah penyebaran spora reproduktif ke lingkungan laboratorium, yang tidak hanya mengancam keselamatan tetapi juga dapat mengontaminasi sampel lain.

2. Penggunaan Kontrol Kualitas (QA/QC)

• Kontrol Positif dan Negatif: Setiap pengujian biokimia atau pewarnaan harus menyertakan kontrol. Misalnya, pada uji sensitivitas atau identifikasi kit (seperti API), kontrol memastikan bahwa reagen masih aktif dan bekerja sesuai standar.

• Validasi Peralatan: Sterilisasi media dan alat harus divalidasi secara berkala, misalnya menggunakan spora Bacillus stearothermophilus untuk memastikan efektivitas autoklaf.

3. Validasi Identifikasi Morfologi dan Biokimia

• Korelasi Makroskopis dan Mikroskopis: Hasil harus divalidasi dengan membandingkan morfologi koloni (warna, tekstur, diameter) pada media padat dengan struktur mikroskopis (hifa, spora, konidia).

• Referensi Standar: Identifikasi divalidasi dengan mencocokkan hasil pengujian biokimia dan morfologi terhadap referensi internasional seperti Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology atau database sistem identifikasi terkomputerisasi (misalnya API STAPH-IDENT atau API 20C).

• Variasi Strain: Validator harus menyadari bahwa hasil biokimia mungkin tidak identik 100% dengan deskripsi manual karena adanya variasi strain di dalam satu spesies. Jika penyimpangan terjadi, pengujian tambahan atau penggunaan kunci dikotomis diperlukan untuk verifikasi lebih lanjut.

4. Konfirmasi dengan Metode Alternatif

• Uji Cepat dan Serologi: Hasil identifikasi awal (presumptif) dapat divalidasi menggunakan tes tambahan yang lebih spesifik, seperti uji germ tube untuk memastikan Candida albicans atau uji aglutinasi lateks untuk mendeteksi antigen spesifik.

• Metode Molekuler dan Massa: Untuk jamur yang sulit diidentifikasi secara tradisional, teknologi modern seperti PCR atau MALDI-TOF Mass Spectrometry memberikan validasi yang sangat akurat dengan menganalisis materi genetik atau profil protein organisme dalam waktu kurang dari satu jam.

5. Dokumentasi dan Pelaporan

• Pencatatan Meticulous: Semua data pengamatan harus dicatat secara teliti segera setelah pemeriksaan selesai. Validator meninjau catatan ini untuk memastikan tidak ada kesalahan klerikal.

• Korelasi Klinis: Hasil laboratorium harus dikorelasikan dengan gejala klinis pasien untuk memastikan temuan tersebut relevan dan bukan sekadar jamur kontaminan saprofit

Penanganan limbah dalam pemeriksaan mikologi sangat krusial untuk mencegah penyebaran spora reproduktif jamur ke lingkungan laboratorium. Berikut adalah prosedur lengkap penanganan limbah berdasarkan standar laboratorium:

1. Prosedur Pembuangan Umum

• Wadah Khusus: Seluruh kultur dan material sisa harus ditempatkan di area pembuangan atau wadah yang diberi label "TERKONTAMINASI" segera setelah sesi laboratorium berakhir.

• Pemisahan Limbah: Barang sekali pakai (plastik) harus dipisahkan dari peralatan gelas dalam wadah yang akan disterilkan. Limbah laboratorium tidak boleh dibuang ke tempat sampah biasa atau bak cuci piring.

• Benda Tajam: Jarum dan pipet Pasteur harus dibuang ke dalam wadah khusus benda tajam (sharps containers).

2. Kategori Limbah dan Penanganannya

• Material Kontaminasi Lembut: Swab, pipet sekali pakai, dan tisu pembersih harus ditempatkan dalam wadah biohazard sebelum di-autoklaf.

• Wadah Kultur: Tabung reaksi yang tertutup dan cawan Petri yang tertutup rapat harus dikumpulkan di area khusus untuk proses sterilisasi uap.

• Unit Pengujian: Alat uji seperti strip API harus dimasukkan seluruhnya ke dalam wadah untuk di-autoklaf setelah data dicatat.

3. Sterilisasi Akhir

• Autoklaf: Ini adalah metode standar utama untuk menghancurkan semua bentuk kehidupan mikroba pada media dan limbah biologis.

• Validasi: Efektivitas proses sterilisasi sering kali dipantau menggunakan spora Bacillus stearothermophilus sebagai kontrol biologis karena ketahanannya yang tinggi terhadap panas.

4. Penanganan Tumpahan dan Kecelakaan

• Jika terjadi tumpahan kultur jamur, area tersebut harus segera ditutup dengan tisu, dijenuhkan dengan desinfektan, dan dibiarkan selama 15 menit sebelum dibersihkan dan dibuang ke wadah limbah infeksius