使用材料與設備:接種環、酒精燈、70%/95%酒精、三角玻棒、燒杯、LB培養基、眾多被無情荼毒的大腸桿菌(Escherichia coli )
接種方法:劃線法(streaking method)、塗抹法(spreading method)
分離方法:分區劃線法、稀釋塗抹法(dilution spreading method)
分區劃線法
使用接種環將菌液分三區劃線。
(企圖分四區劃線但是失敗了所以變這樣QQ)
稀釋塗抹法
使用三角玻棒將菌液均勻塗抹於菌盤上。
使用材料與設備:酒精燈、三角玻棒、鑷子、圓形紙錠、許多化學物質( Ampicillin( 10mg / ml )、蒜頭萃取液、漱口水、10%漂白水、無菌水、眾多被無情荼毒的大腸桿菌(Escherichia coli )、LB培養基
控制方法:紫外光、化學物質感受性實驗(chemicals susceptibility test)
紫外光抑菌實驗
對照組
未經陽光(紫外線)曝曬。
實驗組一
曝曬5分鐘後移入室內。
實驗組二
曝曬20分鐘後移入室內。
曝曬5分鐘的菌盤沒有長菌,但曝曬20分鐘的菌盤卻出現了明顯的菌落。
原因分析:紫外線殺菌的能力可能與曝曬時間有關,但也不排除置於室外而受到汙染的可能性。
化學物質感受性實驗
照片中黑色圈圈處即為AMP之抑菌圈,經量測後直徑約為30mm,具有高度抗生素活性。
(註:抑菌圈直徑小於12mm代表無抗生素活性;直徑介於12-16mm代表具中度抗生素活性;直徑16mm以上即代表具高度抗生素活性)
其他化學物質均無觀察到明顯的抑菌圈。
使用材料與設備:載玻片、光學顯微鏡、拭鏡紙、接種環、酒精燈、鑷子、無菌蒸餾水、95%酒精、鏡油、2% Gram's crystal violet(結晶紫染劑)、Gram's Iodine(格蘭氏碘液)、0.5%Safranin(沙蕃紅)、眾多被無情荼毒的大腸桿菌(Escherichia coli )及枯草桿菌(Bacillus subtilis )
染色法:簡單染色法(Simple staining)、負染色法(Negative staining)、革蘭氏染色(Gram's staining)
簡單染色(E.coli)
使用結晶紫進行染色。
負染色法(E.coli)
使用Nigrosin染劑進行染色。
革蘭氏染色(E.coli)
使用結晶紫與沙蕃紅進行染色。
革蘭氏染色(B.subtilis)
使用結晶紫與沙蕃紅進行染色。
實驗結果
大腸桿菌為革蘭氏陰性菌(染色後呈紅色),枯草桿菌為革蘭氏陽性菌(染色後呈藍紫色)。
問題討論
簡單染色與負染色法的差異?
簡單染色使用帶正電的染料,直接對細菌本體進行染色。(原理:細菌核酸與細胞壁上蛋白質一般帶負電)
負染色法使用帶負電的染料,對環境背景進行染色。(原理:與帶負電的細菌產生排斥,因此照片中白色部分即為細菌)
簡單染色適合觀察細菌排列方式,而負染色法適合觀察細菌外觀。
革蘭氏陽性/陰性菌實驗結果差異原因?
陽性菌的細胞壁具有較厚且緻密的肽聚醣層,可阻擋結晶紫-碘複合體,使受染細菌不因酒精而脫色。因此最後呈現的顏色為結晶紫的藍紫色。
陰性菌的細胞壁較薄且不具緻密的肽聚醣層,而是有著較厚的脂質。因此容易受酒精溶解而使結晶紫-碘複合體漏出,進而脫色。因此最後呈現的顏色為複染劑沙蕃紅的紅色。
因此,革蘭氏染色實驗中最重要的步驟即為酒精脫色。若是這步驟操作不當,則可能出現不同的結果。(陰性出現陽性結果;陽性出現陰性結果)