負染色法
又稱襯托染色法,使用帶負電荷的酸性染料,由於細菌與染料互斥,因此只會將背景染色,並將細菌凸顯出來,常用來觀察細菌是否有莢膜。
革蘭氏染色法
利用革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌的細胞壁組成差異,染色結束後,革蘭氏陽性菌會呈藍紫色,革蘭氏陰性菌會呈現紅色。
1.初染使用的結晶紫將對細胞壁的肽聚醣染色。
2.媒染的革蘭氏碘液則讓碘與結晶紫形成複合體。
3.退染時使用酒精,有溶解脂類的效果,由於陽性菌肽聚醣含量高,且結構緊密,然而陰性菌的脂含量較高,且肽聚醣較鬆散,因此陰性菌的結晶紫-碘複合體容易被酒精脫除,變成無色。
4.最後,用番紅複染,使陰性菌呈紅色。
1.使用熱固定法將大腸桿菌固定在玻片上
2.滴2~3滴結晶紫(Crystal Violet)染劑在玻片上,靜置1分鐘
3.用蒸餾水洗滌瓶將多餘染劑沖掉(不可直接沖菌體)
4.蓋上蓋玻片,以顯微鏡觀察
大腸桿菌(簡單染色法)
1.滴一滴Nigrosin染劑於載玻片邊緣
2.使用接種環或tip勾取一點大腸桿菌菌體在染色體中均勻混和(不需熱固定)
3.用另一乾淨的載玻片,平推染劑和菌體的混和夜,使樣品變淡
4.將蓋玻片蓋在較淡的地方,以顯微鏡觀察
大腸桿菌(負染色法)
1.將大腸桿菌與枯草桿菌分別固定在載玻片上,先以2%結晶紫(Gram Crystal Violet)滴在菌體上,作用10秒鐘,再用蒸餾水沖洗掉剩餘染料
2.加入革蘭氏碘液(Gram Iodine),作用10秒鐘,再用蒸餾水沖洗
3.以95%酒精進行脫色,作用10秒鐘,用蒸餾水沖洗
4.加入番紅(Safranin),作用10秒鐘,用蒸餾水沖洗,接著用拭鏡紙吸除玻片水分,以顯微鏡觀察
大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)(左)
枯草桿菌(革蘭氏陽性菌)(右)
經過這次的實驗,我覺得要成功幫細菌染色,有兩個比較需要注意的小細節:(1)細菌不能取得太多、(2)在革蘭氏染色法退染時,時常不能過長。
第一點是我們的實驗不算太成功的原因,因為我們在取細菌時不小心取得太多,所以在顯微鏡下,細菌都非常大團,放大的倍率也不太夠,要觀察細菌外型的時候就會比較困難一些。
第二點則是因為若是脫色過久,陽性菌的複合體也可能一併被脫去,這時再複染,無論陰性菌或陽性菌都會呈現紅色,這樣一來反而會失去革蘭氏染色的意義。