微生物的染色方法

實驗原理

本次所使用的染色法分別為 :

1.簡單染色法 :

利用單一種染劑(中性的結晶紫)使微生物著色，用於觀察細菌外型

2.革蘭氏染色法 :

此可為初步判斷菌種的方法，其分別菌種的原理在於細菌細胞壁(胜肽聚醣)的厚薄程度。G+菌(革蘭氏陽性菌)細胞壁中的特殊複合物可與染劑結合，因此脫色時較難以脫色 ; G-菌(革蘭氏陰性菌)細胞壁的肽聚醣層較薄，脫色時容易掉色。此外 ，G+菌染色後為藍色；G-菌染色後為紅色。

3.負染色法：

此方法較上述方法不同，因染劑為黑色帶負電，難以進入細菌細胞，因此觀察時背景會為黑色，而觀察的細菌為透明。

討論

Q : 何者為影響革蘭氏染色法菌種不同顏色的原因?

A : 就如上面所描述，細胞壁的胜肽聚醣厚薄會影響留住複合物的能力。因為只有胜肽聚醣能擋住沖洗，而脂質會被溶解，所以留住複合物的細菌最終呈現紫色，為革蘭氏陽性菌，反之則為革蘭氏陰性菌，呈現紅色。

Q : 何者為革蘭氏染色法中最重要的步驟?

A : 酒精脫色為最重要的步驟。由於過度沖刷下陽性菌細胞壁中的染料還是可能被沖掉，所以若操作不當，進行紅色染料染色後可能無法判段陰陽性。