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２０２３年１月：論文発表

論文名：ネオスポラ感染による脳病変を抑える細胞群を発見

ネオスポラの感染は畜産業に多大な経済的損失をもたらすことから、その対策には病態発症機構の解明が重要となります。ネオスポラ症の主徴は流産と神経症状はであり、その病態には宿主の免疫応答が深く関わっています。今回、CXCR3ノックアウト（CXCR3KO）マウスを用いた感染モデルにおいてCXCR3の役割を解析し、CXCR3陽性制御性T細胞が脳病変の抑制に重要であることを見出しました。従って、過剰な炎症反応を適切に制御することで宿主動物の致死的な影響を回避できることが示され、新規ワクチンの開発につながることが期待されます。本研究は、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(21fk0108137h)、挑戦的研究(萌芽)（20K21359）、基盤研究(B)（21H02353)の研究費で実施しました。

Abdelbaky HH, Mitsuhashi S, Watanabe K, Ushio N, Miyakawa M, Furuoka H, Nishikawa Y.

Involvement of chemokine receptor CXCR3 in the defense mechanism against Neospora caninum infection in C57BL/6 mice. 

Front Microbiol. 2023 Jan 10;13:1045106. doi: 10.3389/fmicb.2022.1045106. PMID: 36704563

２０２２年７月：論文発表

論文名：砂漠に生息するエジプトの野生植物の抽出物は、試験管内でトキソプラズマ・ゴンディとネオスポラ・カニナムの増殖を阻害する

野生の薬用植物は、伝統的に抗菌剤として使用されてきました。今回、エジプトの砂漠の野生植物の抽出エキスからトキソプラズマとネオスポラの増殖抑制効果を持つ種類を見出しました。その中でもヨモギ（Artemisia judaica）、フウチョウソウ（Cleome droserifolia）のエキスについては強力な効果を示したため、これら感染症の代替治療薬の生物資源となる可能性が示されました。本研究はSouth Valley大学（エジプト）との共同研究の成果であり、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(21fk0108137h)と国際共同研究B（文部科学省：20KK0152)の研究費で実施しました。

Abdou AM, Seddek AS, Abdelmageed N, Badry MO, Nishikawa Y. 

Extracts of wild Egyptian plants from the desert inhibit the growth of Toxoplasma gondii and Neospora caninum in vitro. 

J Vet Med Sci. 2022 Jul 25;84(7):1034-1040. doi: 10.1292/jvms.22-0159. Epub 2022 Jun 6. PMID: 35661076

医学書院「週刊医学界新聞」で西川義文教授の記事「難敵トキソプラズマ症に挑

む」が掲載されました。2022年3月

web版

https://www.igaku-shoin.co.jp/paper/archive/y2022/3462_03

PDF

https://www.igaku-shoin.co.jp/application/files/6216/4782/9552/3462.pdf

２０２２年３月：論文発表

論文名：トキソプラズマ由来ペルオキシレドキシンの病原性への関与

トキソプラズマはヒトに対して病原性を示し、畜産業にも莫大な経済的損失を与えています。本感染症を制御するためには、病原性の理解に基づいた科学的なアプローチが重要になります。我々の以前の研究で、トキソプラズマ由来ペルオキシレドキシンであるTgPrx1とTgPrx3の組換えタンパク質は免疫活性化作用があることが分かっていましたが（Fereig et al., PLoS One. 2017; Fereig et al., Parasitol Int. 2016）、生理的な役割は不明でした。本研究ではCRISPR-Cas9の遺伝子編集技術によりTgPrx1とTgPrx3の欠損原虫株を作出し、病原性解析を行いました。その結果、TgPrx3欠損株は親株原虫と比較して過剰な炎症反応を誘導し、マウスにおける病原性が増加していました。この結果は、TgPrx3特異的な免疫反応がトキソプラズマの病原性制御に重要であることを示唆しており、ワクチン開発への応用が期待できます。本研究はSouth Valley大学（エジプト）との共同研究の成果であり、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(21fk0108137h)と国際共同研究B（文部科学省：20KK0152)の研究費で実施しました。

Fereig RM, Nishikawa Y. 

Genetic Disruption of Toxoplasma gondii peroxiredoxin (TgPrx) 1 and 3 Reveals the Essential Role of TgPrx3 in Protecting Mice from Fatal Consequences of Toxoplasmosis. 

Int J Mol Sci. 2022 Mar 12;23(6):3076. doi: 10.3390/ijms23063076. PMID: 35328497

２０２２年２月：論文発表

論文名：抗生物質スパルソマイシンの抗マラリア作用

ペプチジルトランスフェラーゼ阻害剤として作用する抗生物質スパルソマイシンの抗マラリア活性を解析しました。熱帯熱マラリア原虫（Plasmosium falciparum 3D7株およびK1株）に対して，スパルソマイシンはそれぞれ12.07および25.43 nMのIC50値を示しました。P. falciparum 3D7をスパルソマイシンで処理すると、形態変化が起こり、リング期の原虫が阻害され、化合物を除去した後でも増殖阻害を維持しました。マウスマラリア原虫（P. yoelii 17XNL株およびP. berghei ANKA株）を用いたマウス感染実験でも、スパルソマイシンの治療効果を確認することができました。今回の結果により、スパルソマイシンをリード化合物とした新たな抗マラリア薬の開発が期待されます。本研究は微生物化学研究所との共同研究の成果であり、特別研究員奨励費（文部科学省：20F20402)、原虫病研究センター共同研究費（2020-joint-14, 27-joint-6, 28-joint-3, 29-joint-4）で実施しました。

Ariefta NR, Pagmadulam B, Nihei CI, Nishikawa Y. 

Sparsomycin Exhibits Potent Antiplasmodial Activity In Vitro and In Vivo. 

Pharmaceutics. 2022 Feb 28;14(3):544. doi: 10.3390/pharmaceutics14030544. PMID: 35335918

２０２２年２月：論文発表

論文名：フィリピンのヒト血清を用いたトキソプラズマのデンスグラニュル抗原（TgGRA6, TgGRA7, TgGRA14）の抗原性解析

トキソプラズマ症の制御には、信頼性の高い診断系の開発が必須です。トキソプラズマは細胞内寄生原虫であるため、簡易検査としては抗体検査が有効です。以前の我々の研究では、フィリピンにおけるトキソプラズマ感染の実態を明らかにしました（Ybañez et al., PLoS One. 2019）。今回、フィリピンのヒト血清を用いたトキソプラズマのデンスグラニュル抗原（TgGRA6, TgGRA7, TgGRA14）の抗原性解析を行いました。TgGRA7に加えて、TgGRA6にも診断用抗原としての有効性が確認できました。今後、これらの診断用抗原を利用した簡便な検査系の開発が期待できます。本研究はセブ工科大学（フィリピン）との共同研究の成果であり、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(21fk0108137h)と国際共同研究B（文部科学省：20KK0152)の研究費で実施しました。

Ybañez RH, Nishikawa Y.

Comparative Performance of Recombinant GRA6, GRA7, and GRA14 for the Serodetection of T. gondii Infection and Analysis of IgG Subclasses in Human Sera from the Philippines. 

Pathogens. 2022 Feb 21;11(2):277. doi: 10.3390/pathogens11020277. PMID: 35215219

２０２１年１２月：論文発表

論文名：脂質ナノ粒子を基盤技術としたトキソプラズマのデンスグラニュル15搭載DNAワクチンの感染防御効果

トキソプラズマはヒトと家畜動物に感染し公衆衛生的にも問題視されており、安全で有効なワクチンの開発が望まれています。今回、細胞質で自己崩壊するようデザインされた脂質ナノ粒子を基盤とし、トキソプラズマ用DNAワクチンの開発を試みました。以前の我々の研究で免疫活性化能を有する原虫遺伝子としてデンスグラニュル15（TgGRA15）を見出しており（Ihara et al., Front Immunol. 2020）、前述のナノ粒子にTgGRA15遺伝子を搭載してマウスの感染実験系で評価しました。本DNAワクチン接種により抗原特異的な免疫反応が誘導され、ワクチン接種マウスは感染抵抗性を示しました。本結果により、新型DNAワクチン開発への展開が期待されます。本研究はChattogram Veterinary and Animal Sciences University（バングラデシュ）、千葉大学との共同研究の成果であり、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(21fk0108137h)と国際共同研究B（文部科学省：20KK0152)の研究費で実施しました。

Hasan T, Kawanishi R, Akita H, Nishikawa Y. 

Toxoplasma gondii GRA15 DNA Vaccine with a Liposomal Nanocarrier Composed of an SS-Cleavable and pH-Activated Lipid-like Material Induces Protective Immunity against Toxoplasmosis in Mice. 

Vaccines (Basel). 2021 Dec 24;10(1):21. doi: 10.3390/vaccines10010021. PMID: 35062682

２０２１年１２月：論文発表

論文名：モンゴルの薬草由来化合物ライブラリーを利用した抗原虫薬開発への可能性

生物多様性を有する国では有望な天然生物資源が存在します。モンゴルの薬草は創薬資源として大きな可能性を秘めており、今回はモンゴルの薬草由来化合物179種のマラリア原虫とトキソプラズマ に対する増殖阻害活性を評価しました。マラリア原虫を阻害する化合物として、brachangobinan A (IC50 2.62 μM)、oxazole (IC50 3.58 μM)、 chrysosplenetin (IC50 3.78 μM)、4,11-di-O-galloylbergenin (IC50 3.87 μM) 、2-(2′ ,5′ -dihydroxyphenyl)-5-(2′′ - hydroxyphenyl)oxazole (IC50 6.94 μM)が同定されました。また、トキソプラズマを阻害するricin (IC50 12.94 μM)も同定されました。今後は、これら化合物をリード化合物とした創薬展開が期待されます。本研究はモンゴル国立大学、獣医学研究所（モンゴル）、東北医科薬科大学との共同研究の成果であり、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(20fk0108137h)と科研費（20KK0152）で実施しました。

Banzragchgarav O, Ariefta NR, Murata T, Myagmarsuren P, Battsetseg B, Battur B, Batkhuu J, Nishikawa Y. 

Evaluation of Mongolian compound library for potential antimalarial and anti-Toxoplasma agents. 

Parasitol Int. 2021 Dec;85:102424. doi: 10.1016/j.parint.2021.102424. Epub 2021 Jul 22. PMID: 34302982

２０２１年１２月

：論文発表

論文名：モンゴル植物由来エキスのマラリア原虫とトキソプラズマに対する抑制効果

生物多様性を有する国では有望な天然生物資源が存在します。モンゴルの薬草は創薬資源として大きな可能性を秘めており、今回はモンゴルの薬草由来エキス43種のマラリア原虫とトキソプラズマ に対する増殖阻害活性を評価しました。マラリア原虫を阻害する植物エキスとして、Galatella dahurica leaf + flower, Leonurus deminutus leaf + flower, Oxytropis trichophysa aerial part, Schultzia crinita whole plant, Leの６種が同定されました。また、トキソプラズマを阻害するAmaranthus retroflexus rootも同定されました。今後は、これら植物エキスをシーズとした創薬展開が期待されます。本研究はモンゴル国立大学、獣医学研究所（モンゴル）との共同研究の成果であり、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(20fk0108137h)と科研費（20KK0152）で実施しました。

Banzragchgarav O, Batkhuu J, Myagmarsuren P, Battsetseg B, Battur B, Nishikawa Y. 

In Vitro Potently Active Anti-Plasmodium and Anti-Toxoplasma Mongolian Plant Extracts. 

Acta Parasitol. 2021 Dec;66(4):1442-1447. doi: 10.1007/s11686-021-00401-8. PMID: 34023977

２０２１年１１月：論文発表

論文名：トキソプラズマ感染に対するマウス脳組織の免疫反応におけるケモカイン受容体CXCR3の役割

トキソプラズマは脳内に感染して脳機能に様々な障害を与えると考えられていますが、その全貌は解明されていません。以前の我々の研究では、マウス脳組織を用いた網羅的トランスクリプトーム解析により、感染依存的にケモカイン受容体CXCR3とそのリガンドCXCL10の発現が上昇することが明らかにされています（Tanaka et al., Infect Immun. 2013）。今回、CXCR3欠損マウスを用いて、トキソプラズマ感染に対する脳細胞の応答性を解析しました。野生型マウスと比較して、CXCR3欠損マウスは感染による臨床症状が増悪し、脳内原虫数と脳組織の炎症が増加していました。ミクログリアとアストロサイトの初代培養細胞を作製し、原虫感染による遺伝子発現の解析を実施しました。その結果、CXCR3かつ原虫感染依存的な遺伝子として、免疫反応に関与する一連の遺伝子が見出されました。今回の結果は、脳内原虫のコントロールにはグリア細胞のCXCR3依存的な免疫反応が一定の役割を担っていることを示しています。本研究はSouth Valley大学（エジプト）、東京大学との共同研究の成果であり、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(21fk0108137h)と科研費（2011/LS003, JP24880006, JP17K17570, JP15K15118, 17K19538, 20KK0152, 20K21359, 21H02353で実施しました。

Umeda K, Goto Y, Watanabe K, Ushio N, Fereig RM, Ihara F, Tanaka S, Suzuki Y, Nishikawa Y. 

Transcriptomic Analysis of the Effects of Chemokine Receptor CXCR3 Deficiency on Immune Responses in the Mouse Brain during Toxoplasma gondiiInfection. 

Microorganisms. 2021 Nov 12;9(11):2340. doi: 10.3390/microorganisms9112340. PMID: 34835465

２０２１年１１月：論文発表

論文名：トキソプラズマ感染に対する新たな薬剤：ポリエーテルイオノホア・キジマイシン

ポリエーテル系抗生物質は反芻動物の飼料に広く用いられ、寄生虫病のコクシジウム症やマラリアに効果があるとされている。今回、ポリエーテル系抗生物質のキジマイシンについて、トキソプラズマ症に対する効果を検証した。キジマイシンは宿主細胞内と宿主細胞外のトキソプラズマに対する殺滅効果を示し（IC50：宿主細胞内45.6 ± 2.4 nM、宿主細胞外216.6 ± 1.9 pM）、原虫の膨化を誘導した。別のポリエーテル系抗生物質のモネンシンと同様に、キジマイシンは原虫のミトコンドリア膜電位を減少させ、活性酸素種の産生を増加させることで障害を与えることが明らかとなった。また、キジマイシンは感染マウスに対する治療効果を示した。今回の結果により、キジマイシンが家畜のトキソプラズマ症の治療薬として有効である可能性が示された。本研究はマヒドン大学（タイ）、微生物化学研究所との共同研究の成果であり、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(21fk0108137h)、科研費（20KK0152, 26670204）、原虫病研究センター共同研究費（2020-joint-14, 27-joint-6, 28-joint-3, 29-joint-4）で実施しました。

Leesombun A, Nihei CI, Kondoh D, Nishikawa Y. 

Polyether ionophore kijimicin inhibits growth of Toxoplasma gondii and controls acute toxoplasmosis in mice. 

Parasitol Res. 2022 Jan;121(1):413-422. doi: 10.1007/s00436-021-07363-w. Epub 2021 Nov 9. PMID: 34750652.

２０２１年１０月：論文発表

論文名：ウシのネオスポラ感染に対する血清診断法の開発：ネオスポラ抗原を搭載したイムノクロマトテストの有効性の検証

ネオスポラ感染はウシの流産を引き起こすことから、畜産業に経済的な損失を与えます。ネオスポラ感染を制御するためには、迅速簡便な検査系を開発することが重要です。今回、ネオスポラの組換え抗原（NcSAG1, NcGRA6, NcGRA7、可溶性ライセート）を搭載したイムノクロマトを作製し、マウスとウシの血清を用いて有効性を評価しました。その結果、NcSAG1を搭載したイムノクロマトが最も優れた特異性と感度を示しました。今後は、この結果をもとにした診断系の実用化が望まれます。本研究はSouth Valley大学（エジプト）との共同研究の成果であり、科研費（18H02335, 20K21359, 21H02353）、JSTバリュープログラム (VP29117937665)、伊藤記念財団、旗影会、畜産ニューテック協会の研究助成で実施しました。

Fereig RM, Abdelbaky HH, Nishikawa Y. 

Comparative Evaluation of Four Potent Neospora caninumDiagnostic Antigens Using Immunochromatographic Assay for Detection of Specific Antibody in Cattle. 

Microorganisms. 2021 Oct 11;9(10):2133. doi: 10.3390/microorganisms9102133. PMID: 34683454

２０２１年１０月：論文発表

論文名：Toll様受容体2（TLR2）は妊娠後期のトキソプラズマ 感染により引き起こされる異常妊娠に関与する

妊娠期のトキソプラズマ感染は流産、死産、早産の原因となることが知られていますが、その発症メカニズムの詳細は明らかにされていません。Toll様受容体2（TLR2）は免疫細胞や胎盤に発現していますが、トキソプラズマの妊娠期感染におけるTLR2の役割は分かっていません。妊娠後期のトキソプラズマ感染マウスモデルで解析したところ、野生型マウスでは異常妊娠が認められますが、TLR2欠損マウスでは異常妊娠が有意に減少しました。TLR2欠損マウスでは感染に対する炎症性反応が減弱しており、胎盤への障害が起こりにくいことが推測されました。今回の結果により、妊娠期のTLR2への刺激はトキソプラズマ 感染病態を悪化させ、胎盤の機能低下につながると考えられます。従って、先天性トキソプラズマ症に対するTLR2の阻害による新たな治療法の開発につながることが期待されます。本研究はSouth Valley大学（エジプト）との共同研究の成果であり、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(21fk0108137h)と科研費（20KK0152, 20K21359, 21H02353）で実施しました。

Ikeda R, Ushio N, Abdou AM, Furuoka H, Nishikawa Y. 

Toll-Like Receptor 2 is Involved in Abnormal Pregnancy in Mice Infected with Toxoplasma gondiiDuring Late Pregnancy. 

Front Microbiol. 2021 Oct 5;12:741104. doi: 10.3389/fmicb.2021.741104. PMID: 34675905

２０２１年８月：論文発表

論文名：北海道の流産胎仔由来ネオスポラの集団遺伝解析

ネオスポラ感染による牛の流産は日本でも発生していますが、原虫の集団遺伝構造は不明です。今回、北海道の流産胎仔由来ネオスポラを対象にマイクロサテライト解析を行い、遺伝構造を決定しました。これまでに報告されている世界のネオスポラ遺伝子型とは異なる集団となる日本特有の集団が見つかりました。今回の結果は、日本国内でネオスポラが垂直感染、水平感染により独自に維持されていることを示しています。本研究はマンスーラ大学（エジプト）との共同研究の成果であり、科研費（18H02335, 20K21359）で実施しました。

El-Alfy ES, Ohari Y, Shimoda N, Nishikawa Y. 

Genetic characterization of Neospora caninum from aborted bovine fetuses in Hokkaido, Japan. 

Infect Genet Evol. 2021 Aug;92:104838. doi: 10.1016/j.meegid.2021.104838. Epub 2021 Apr 2. PMID: 33819682

Parasitology International誌のゲストエディターとして編集した "Organelle Biology in Protozoan Parasites"特集がonlineで出版されました。        2021年8月

２０２１年１月：論文発表 https://iai.asm.org/content/89/2/e00253-20.long

論文名：トキソプラズマによる流産の病態発症メカニズムの解明

トキソプラズマ症は偏性細胞内寄生性原虫であるトキソプラズマ（Toxoplasma gondii）によって引き起こされる人獣共通感染症であり、世界中で発生しています。先天性トキソプラズマ症の症状は胚死・吸収から不顕性感染まで多岐に渡りますが、発症機序は不明です。C-X-Cモチーフのケモカイン受容体3（CXCR3）は主にTh1関連免疫細胞に高発現し、免疫細胞の遊走と活性化や妊娠維持にも関与しています。しかし、トキソプラズマの妊娠期感染におけるCXCR3の役割や分子機構についてはまだ十分に理解されていません。本研究ではCXCR3欠損マウス（CXCR3-/-）を用いて、妊娠初期のトキソプラズマ感染に対するCXCR3の役割を調べました。妊娠3.5日目（Gd3.5）にCXCR3-/-マウスと野生型マウスへトキソプラズマを腹腔内接種しました。両感染群ともに妊娠日の進行とともに壊死を呈する胚が増加し妊娠率が低下しましたが，CXCR3-/-感染マウスではより顕著な胚の喪失が認められました。またGd10.5において、胎盤組織の原虫感染量はCXCR3-/-マウスで有意に増加しました。更にGd13.5の胎盤組織では、野生型感染マウスと比較しCXCR3-/-感染マウスにおいて誘導性一酸化窒素合成酵素 (iNOS)とCD8のmRNA発現量が有意に減少しました。これらの結果は、妊娠初期のCXCR3依存的な宿主免疫応答がトキソプラズマ感染に対する妊娠維持に重要な役割を果たしていることを示唆しています。本研究結果は、科学雑誌Infection and ImmunityのSpotlight Selectionに選出されました。本研究は、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(19fk0108047h0003, 20fk0108137h0001)で実施しました。

Nishida A, Ikeda R, Furuoka H, Nishikawa Y. 

CXCR3-Dependent Immune Pathology in Mice following Infection with Toxoplasma gondii during Early Pregnancy. 

Infect Immun. 2021 Jan 19;89(2):e00253-20. doi: 10.1128/IAI.00253-20. PMID: 33199353

２０２１年４月：論文発表 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1383576920302178?via%3Dihub

論文名：天然物からの抗原虫薬の探索

メタサイトフィリンは昆虫病原糸状菌メタリジウムから分離され、我々の研究によりトキソプラズマ感染に対する治療効果が確認されています。今回、メタサイトフィリンのマラリア原虫に対する阻害作用を検証しました。メタサイトフィリンは熱帯熱マラリア原虫3D7株とクロロキン耐性K-1株に対して増殖抑制効果を示し（それぞれのIC50値：666 nM、605 nM）、特にリング期の原虫に効果的でした。以上より、メタサイトフィリンはマラリア治療薬のリード化合物になる可能性が示されました。本研究は微生物科学研究所、タイ・マヒドン大学との共同研究の成果であり、公益財団法人・寿原記念財団、帯広畜産大学原虫病研究センター共同研究費（27-joint-6, 28-joint-3, 29-joint-4）の研究助成で実施しました。

Leesombun A, Iijima M, Pagmadulam B, Orkhon B, Doi H, Issiki K, Sawa R, Nihei CI, Nishikawa Y. 

Metacytofilin has potent anti-malarial activity. 

Parasitol Int. 2021 Apr;81:102267. doi: 10.1016/j.parint.2020.102267. Epub 2020 Dec 8. PMID: 33307212.

２０２０年７月：論文発表 https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2020.01709/full

論文名：トキソプラズマ由来因子による宿主免疫撹乱メカニズムの解明

トキソプラズマは、宿主細胞に侵入するとロプトリー(ROP)またはデンスグラニュル(GRA)と呼ばれる細胞小器官から様々なタンパク質を分泌し、その一部は宿主の免疫応答を撹乱することが知られています。寄生虫分子による宿主免疫の制御メカニズムを明らかにすることで、新たな治療法の開発につながることが期待されています。本研究では、Th1型免疫応答を誘導するNFκB経路に焦点を当て、レポータープラスミドを用いてNFκBを活性化する分子のスクリーニングを行い、II型原虫のGRA7、GRA14、GRA15の過剰発現が強い活性を示すことを見出しました。そこで本研究では、これら3つの分子の比較分析を行い、トキソプラズマ症の病態におけるNFκBの関与を理解することを目的としました。トキソプラズマのGRA7、GRA14、GRA15はNFκBを活性化することで宿主免疫応答を活性化し、寄生虫の増殖を抑制的に制御することが明らかとなりました。また、II型原虫でのGRA14の寄与は限定的なものでしたが、活性型GRA15を持たないI型RH株を用いて、マウスに原虫を足蹠内接種したところ、親株では80%以上のマウスが生存したのに対してGRA14欠損株で全てのマウスが４週間以内に死亡しました。トキソプラズマの病原性は遺伝子型によって大きく異なりますが、その違いは免疫撹乱分子の遺伝子多型性によって規定されます。このことから、GRA15の活性の低い株では、GRA14による免疫活性化が宿主の生存に必要であることが示唆されました。トキソプラズマは、感染慢性期に宿主の脳や筋肉内にシストを形成し潜伏感染へと移行します。感染初期に宿主免疫を活性化させ宿主の死を阻止することは、新たな宿主へ伝播する機会の拡大に役立つことから、GRA7、GRA14、GRA15によるNFκB経路活性化はトキソプラズマの寄生戦略に重要な役割を持つことが示されました。本研究は大阪大学微生物病研究所、エジプト・South Valley大学との共同研究の成果であり、日本医療研究開発機構 (AMED)の研究助成(19fk0108047h0003, 20fk0108137h0001)で実施しました。

Ihara F, Fereig RM, Himori Y, Kameyama K, Umeda K, Tanaka S, Ikeda R, Yamamoto M, Nishikawa Y. 

Toxoplasma gondii Dense Granule Proteins 7, 14, and 15 Are Involved in Modification and Control of the Immune Response Mediated via NF-κB Pathway. 

Front Immunol. 2020 Jul 31;11:1709. doi: 10.3389/fimmu.2020.01709. eCollection 2020. PMID: 32849602.

２０２０年６月：論文発表 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0014489420300400?via%3Dihub

論文名：ネオスポラの診断方法の開発

ネオスポラの感染は病態が慢性化するため、感染急性期に診断する手法の開発が重要となります。今回、尿サンプルからネオスポラ感染を判定できるかを検証しました。ネオスポラ抗原NcGRA7とNcSAG1を用いたELISAでは、急性感染期と慢性感染期のマウスの尿サンプルから特異的なIgG1やIgG2を検出することができました。今回の結果により、血液サンプルに加え、尿サンプルもネオスポラ抗体検査に有用であることが示されました。本研究はSouth Valley大学（エジプト）との共同研究の成果であり、基盤研究B（一般）（文部科学省：18H02335)、JSTバリュープログラム (VP29117937665)、伊藤記念財団の研究助成で実施しました。

Fereig RM, Nishikawa Y. 

Urological detection of specific antibodies against Neospora caninum infection in mice: A prospect for novel diagnostic approach of Neospora. 

Exp Parasitol. 2020 Sep;216:107942. doi: 10.1016/j.exppara.2020.107942. Epub 2020 Jun 26. PMID: 32598889.

２０２０年２月：論文発表 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=PMID%3A+32092466

論文名：トキソプラズマのデンスグラニュル抗原TgGRA7を搭載したイムノクロマトテストを用いたヒトにおけるトキソプラズマ感染の抗体検出

トキソプラズマは世界で最も一般的な寄生虫症の一つであるトキソプラズマ症を引き起こします。本原虫はその生存に必要なデンスグラニュル抗原を非常に多く分泌します。TgGR7は、宿主細胞の細胞膜や細胞質、寄生胞膜やその内腔に多く存在します。急性感染期と慢性感染期において、TgGRA7は抗体産生を強力に刺激します。TgGRA7は酵素結合免疫吸着測定法 (ELISA) の抗原として利用されてきましたが、イムノクロマトテスト（ICT）への応用はブタでの使用が試されたのみです。今までにTgGRAを搭載したICT（TgGRA7-ICT）がヒトのトキソプラズマ症に使用されたことはありません。今回、ヒト血清８８検体を用いてTgGRA7-ICTの有効性を評価しました。TgGRA7を搭載したELISA、市販のELISAキット、ラテックス凝集試験（LAT）で得られた結果を比較し、感度、特異性、一致度から判断してTgGRA7-ICTは標準試験と同等の反応性を示すことが明らかとなりました。TgGRA7-ICT上に検出されるバンドの濃さはELISAの結果で得られる抗体レベルの値と性の相関を示しました。今回の結果は、TgGRA7-ICTがヒトのトキソプラズマ症の診断に効果を発揮し、本感染症の定期的な検査に有効であることが示唆されました。本研究結果の一部は、新興・再興感染症に対する革新的医薬品等開発推進研究事業 (AMED: JP19fk0108047)の研究助成で実施しました。

Ybañez RHD, Nishikawa Y.  

Serological detection of T. gondii infection in humans using an immunochromatographic assay based on dense granule protein 7.

Parasitol Int. 2020 Feb 21;76:102089. doi: 10.1016/j.parint.2020.102089. 

PMID: 32092466

２０２０年２月：論文発表  https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=PMID%3A+32037381

論文名：トキソプラズマのデンスグラニュル抗原TgGRA7を搭載したイムノクロマトテストを用いたネコにおけるトキソプラズマ感染の抗体検出

トキソプラズマは世界で最も一般的な寄生虫症の一つであるトキソプラズマ症を引き起こします。トキソプラズマのGRA7タンパク質（TgGRA7）は寄生胞や寄生胞膜及びシスト壁に必要な構成要素です。TgGRA7は酵素結合免疫吸着測定法 (ELISA) の抗原として利用されてきましたが、イムノクロマトテスト（ICT）への応用はブタでの使用が試されたのみです。今までにTgGRAを搭載したICT（TgGRA7-ICT）がネコのトキソプラズマ感染の診断に使用されたことはありません。今回、ネコの血清100検体を用いてTgGRA7-ICTの有効性を評価しました。TgGRA7あるいは原虫ライセートを搭載したELISA、市販のラテックス凝集試験（LAT）で得られた結果を比較し、感度、特異性、一致度から判断してTgGRA7-ICTは標準試験と同等の反応性を示すことが明らかとなりました。今回の結果は、TgGRA7-ICTがネコのトキソプラズマ症の診断に効果を発揮し、本感染症の定期的な検査に有効であることが示唆されました。本研究結果の一部は、新興・再興感染症に対する革新的医薬品等開発推進研究事業 (AMED:JP19fk0108047)の研究助成で実施しました。

Ybañez RHD, Kyan H, Nishikawa Y. 

Detection of antibodies against Toxoplasma gondii in cats using an immunochromatographic test based on GRA7 antigen. J Vet Med Sci. 2020 Feb 7. doi: 10.1292/jvms.19-0654. [Epub ahead of print] PMID: 32037381

２０２０年４月：論文発表 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=PMID%3A+31881363

論文名：ウシネオスポラ症の血清学診断に有効な原虫抗原の評価

ネオスポラ感染により引き起こされる流産や繁殖障害はウシなどの家畜産業に大きな経済的損失を与えます。これまでにネオスポラ感染による流産を調べることのできる血清診断方法は報告されていません。本研究では、各種ネオスポラ抗原のウシの流産に関連する診断への有効性を評価しました。５つの候補抗原 (NcGRA6, NcGRA7, NcGRA14, NcCyP, NcSAG1) を酵素結合免疫吸着測定法 (ELISA) へ搭載し、ネオスポラを実験感染させたマウス及びウシの血清を用いて比較解析を行いました。そこで選択された３つの抗原 (NcSAG1, NcGRA7, and NcGRA6) については、ネオスポラ症発症により流産を起こしたウシ由来の血清を用いて追加の解析を実施し、NcSAG1とNcGRA7の診断用抗原としての有効性が確認されました。ネオスポラ症による流産が発症した農家では、流産発生牛におけるNcSAG1とNcGRA7の抗体レベルは優位に高くなっていました。牛妊娠期における特異抗体レベルの変動を追跡したところ、分娩前後におけるNcSAG1とNcGRA7の抗体レベルの急上昇が確認されました。その一方で、子牛の神経症状の有無によるNcSAG1とNcGRA7の抗体レベルの差は認められませんでした。以上の結果により、NcSAG1とNcGRA7はネオスポラ感染によるウシの流産に関与する何らかのマーカー分子であることが推測されました。本研究はＪＡ士幌町、北海道家畜保健衛生所、South Valley大学（エジプト）などとの共同研究の成果であり、基盤研究（B）（一般）（日本学術振興会：15H04589, 18H02335)、JSTバリュープログラム (VP29117937665)、伊藤記念財団の研究助成で実施しました。

Abdelbaky HH, Nishimura M, Shimoda N, Hiasa J, Fereig RM, Tokimitsu H, Inokuma H, Nishikawa Y. 

Evaluation of Neospora caninum serodiagnostic antigens for bovine neosporosis. 

Parasitol Int. 2020 Apr;75:102045. doi: 10.1016/j.parint.2019.102045. PMID: 31881363

２０２０年２月：論文発表 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=PMID%3A+31634631

論文名：モンゴルにおけるヒツジとヤギのトキソプラズマ感染の血清疫学調査

トキソプラズマ症はトキソプラズマ原虫の感染により引き起こされます。生肉や加熱不十分な食肉を摂取することは、ヒトにおける大きな感染要因となります。モンゴルでは、ヤギやヒツジ由来の肉製品が主に消費されますが、これら小型反芻獣におけるトキソプラズマ感染の疫学調査は進んでいません。本研究では、トキソプラズマ抗原TgGRA7を搭載した酵素結合免疫吸着測定法 (ELISA)によりモンゴルにおけるヤギとヒツジのトキソプラズマ感染を調査しました。ヤギ（首都と17県から1,078検体）とヒツジ（首都と21県から882検体）の血清サンプルを解析したところ、トキソプラズマ抗体の陽性率はヤギで32%、ヒツジで34.8%でした。ヤギの感染率は西部（42.7%）と東部（45.6%）で高く、ヒツジの感染率は東部（55.4%）で高い結果が得られました。ヤギにおける感染要因は年齢であることが推測されましたが、ヒツジでは年齢や性別は感染要因とはなりませんでした。今回の結果はモンゴルの小型反芻獣においてトキソプラズマの感染が蔓延している可能性を示しており、全国レベルでの感染コントロールの必要性が示唆されました。本研究はモンゴル生命科学大学・獣医学研究所（モンゴル）などとの共同研究の成果であり、the Science and Technology Research Partnership for Sustainable Development (SATREPS)（AMED/JICA：17jm0110006h0005)、伊藤記念財団の研究助成で実施しました。

Pagmadulam B, Myagmarsuren P, Yokoyama N, Battsetseg B, Nishikawa Y. 

Seroepidemiological study of Toxoplama gondii in small ruminants (sheep and goat) in different provinces of Mongolia. 

Parasitol Int. 2020 Feb;74:101996. doi: 10.1016/j.parint.2019.101996. PMID: 31634631.

２０１９年９月：論文発表 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=PMID%3A+31506064

論文名：マウス初代脳細胞におけるトキソプラズマ感染へのCCR5依存的応答に関するトランスクリプトーム解析

CCケモカイン受容体5（CCR5）を含むケモカイン系は、細胞の遊走や活性化だけでなく神経機能への作用も近年明らかになりつつあります。トキソプラズマ感染時、CCR5欠損（CCR5KO）マウスでは野生型（WT）と比べ、死亡率や脳内シスト数の増加が報告されています。当研究室でも、マウス脳組織の網羅的発現解析により、CCR5とそのリガンドCCL5の発現が感染に応答して上昇することを報告しています。本研究では、原虫感染へのCCR5依存的応答の詳細を調べるため、マウス胎仔脳からアストロサイト、ミクログリア、ニューロンを分化誘導し、原虫感染後24時間で細胞種ごとにRNA-seqを実施しました。さらに、原虫感染マウスの脳組織を用い、初代脳細胞の解析で見出されたCCR5依存的な感染応答遺伝子の発現、および脳内原虫数の定量を行いました。RNA-seqでは、ニューロンでは他の細胞種に比べその数は少なかったものの、各細胞種とも免疫関連遺伝子を含む遺伝子群にCCR5依存的な発現上昇が認められました。これらの遺伝子のほとんどは、脳組織の解析では感染による発現変動はあってもCCR5欠損の影響は見られず、脳内原虫数にもマウス系統間で有意差は見られませんでした。その中で、炎症性タンパク質の一種、血清アミロイドA3（Saa3）のみCCR5依存的な発現上昇を示しました。これは脳内の炎症がCCR5の欠損によって一部抑制されたことを示唆しています。また、その他の遺伝子で、初代脳細胞に見られたCCR5依存的な発現変動が脳組織で見られなかったことは、脳細胞種同士や末梢からの浸潤細胞の作用により細胞種特異的な反応が隠蔽されたことを示唆しています。これらは局所的な病態の制御にCCR5が一定の役割を果たす可能性を示し、本研究によって原虫感染時の脳におけるCCR5の機能の一端が明らかになりました。本研究は東京大学大学院新領域創成科学研究科などとの共同研究の成果であり、最先端・次世代研究開発支援プログラム（日本学術振興会：2011/LS003）、挑戦的萌芽研究（日本学術振興会：JP15K15118）, 挑戦的研究（萌芽）（日本学術振興会：JP17K19538）、若手研究(B) （日本学術振興会：JP17K17570）、新興・再興感染症に対する革新的医薬品等開発推進研究事業（AMED、17fk0108120h0001)の研究助成で実施しました。

Kobayashi K, Umeda K, Ihara F, Tanaka S, Yamagishi J, Suzuki Y, Nishikawa Y. 

Transcriptome analysis of the effect of C-C chemokine receptor 5 deficiency on cell response to Toxoplasma gondii in brain cells. 

BMC Genomics. 2019 Sep 11;20(1):705. doi: 10.1186/s12864-019-6076-4. PMID: 31506064

２０１９年８月：論文発表

論文名：クリプトスポリジウム・パルバム感染子牛の腸内細菌叢におけるフソバクテリウム属細菌の特異的な増加

腸内環境は動物の健康に重要な働きをしますが、腸内環境の構成成分の変化は下痢症と関連します。しかしながら、ウシの下痢症を引き起こすクリプトスポリジウム原虫の感染は腸内環境を変化させるのかについては分かっていません。本研究では、クリプトスポリジウム・パルバム（Cryptosporidium parvum）が感染した子牛の腸内細菌叢の変化を解析しました。クリプトスポリジウム感染群、ロタウイルス感染群、これら病原体非感染群の糞便サンプルをメタゲノム解析により比較したところ、フソバクテリウム属細菌の割合がクリプトスポリジウム感染により増加することが示されました。さらに、クリプトスポリジウムとフソバクテリウム属細菌が共存することにより、下痢症状が悪化していました。地理的に離れている場所（北海道、岩手、沖縄）からのサンプルを解析しても、フソバクテリウム属細菌とクリプトスポリジウム感染の相関性が認めれられました。今回の結果により、腸内細菌叢内のフソバクテリウム属細菌の増加はクリプトスポリジウム症の悪化要因になることが示唆されました。本研究は岩手大学農学部、大阪大学微生物病研究所などとの共同研究の成果であり、帯広畜産大学原虫病研究センター共同研究費 (27-joint-2, 28-joint-6)、大阪大学微生物病研究所共同研究費の研究助成で実施しました。

Ichikawa-Seki M, Motooka D, Kinami A, Murakoshi F, Takahashi Y, Aita J, Hayashi K, Tashibu A, Nakamura S, Iida T, Horii T, Nishikawa Y. 

Specific increase of Fusobacterium in the faecal microbiota of neonatal calves infected with Cryptosporidium parvum. 

Sci Rep. 2019 Aug 29;9(1):12517. doi: 10.1038/s41598-019-48969-6. PMID: 31467354

２０１９年８月：論文発表 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=PMID%3A+31404078

論文名：トキソプラズマ慢性感染期の脳病態と宿主の行動変化におけるToll-like receptor 2の関与

トキソプラズマの慢性感染は宿主の中枢神経系を障害し、さまざまな行動の変化を引き起こします。我々は最近、Toll-like receptor２(TLR2)が急性期の神経炎症の誘導に重要であることを報告しましたが、慢性期の脳病態への関与は依然不明です。そこで本研究では、野生型(WT)およびTLR2欠損(TLR2KO)マウスを用いて、トキソプラズマ感染によるマウスの脳病態や行動への影響を比較することで、慢性期におけるTLR2の役割を明らかとすることを目的としました。WTおよびTLR2KOマウスに非感染群、トキソプラズマ(PLK株)感染群を設定し、感染群における病理組織学的な病変、脳内原虫量、および脳組織中の炎症性サイトカイン類の遺伝子発現量を比較しました。次に、感染３０日後からマウスの行動を評価する３種の行動実験を実施しました。病理学的な解析の結果、慢性期における脳組織の病変はWTとTLR2KO間で同程度に観察されましたが、感染３０日後の脳内原虫量はTLR2KOマウスで有意に増加していました。また、炎症性サイトカイン類(インターロイキン12p40、iNOSなど)の発現量に差は認められませんでした。行動実験の結果、非感染群間の比較ではTLR2の欠損により、不安の増強と恐怖記憶の亢進が示されました。一方、感染群間ではTLR2KOマウスにおいて、感染による恐怖記憶障害の部分的な回復が認められました。以上のことから、TLR2は慢性期の脳内の炎症レベルや組織障害への関与は少ないが、原虫数を抑制する働きを持つことが示されました。また、トキソプラズマ感染による宿主の恐怖記憶障害は部分的にTLR2依存的な応答によることが示唆されました。慢性的な神経炎症は核内因子κB経路を活性化させ、恐怖記憶を阻害することから、トキソプラズマ感染による慢性期の神経障害にTLR2が一定の役割を担っていることが考えられました。本研究は最先端・次世代研究開発支援プログラム（日本学術振興会：2011/LS003）、挑戦的萌芽研究（日本学術振興会：JP15K15118）, 挑戦的研究（萌芽）（日本学術振興会：JP17K19538）、スタートアップ（日本学術振興会：24880006）、若手研究（日本学術振興会：15J03171, 18K14577, JP17K17570）、新興・再興感染症に対する革新的医薬品等開発推進研究事業（AMED、17fk0108120h0001)の研究助成で実施しました。の研究助成で実施しました。

Ihara F, Tanaka S, Fereig RM, Nishimura M, Nishikawa Y. 

Involvement of Toll-like receptor 2 in the cerebral immune response and behavioral changes caused by latent Toxoplasma infection in mice. 

PLoS One. 2019 Aug 12;14(8):e0220560. doi: 10.1371/journal.pone.0220560. PMID: 31404078

２０１９年６月：論文発表 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=PMID%3A+31188858

論文名：フィリピン・セブ島におけるトキソプラズマ感染の疫学調査と感染要因の解析

トキソプラズマの感染は世界中に広がっていますが、フィリピンでの感染の実態は分かっていません。今回、フィリピン・セブ島におけるトキソプラズマ感染の血清疫学調査を行いました。ヒト、ネコ、ブタを対象に疫学調査を実施し、トキソプラズマの感染実態を明らかにしました（抗体陽性率：ヒト（26.3%）、ネコ（42.3%）、ブタ（13.4%））。ヒトへの感染リスク要因として、ネコとの接触、豚肉など屋台の食べ物の摂食が推測されました。今回の結果はフィリピンにおけるトキソプラズマ感染のリスクを示しており、今後の公衆衛生的なコントロールの必要性が示されました。本研究はフィリピン大学・セブ校、セブ工科大学、Visayas大学との共同研究の成果であり、寿原記念財団の研究助成で実施しました。

Ybañez RHD, Busmeon CGR, Viernes ARG, Langbid JZ, Nuevarez JP, Ybañez AP, Nishikawa Y. 

Endemicity of Toxoplasma infection and its associated risk factors in Cebu, Philippines. 

PLoS One. 2019 Jun 12;14(6):e0217989. doi: 10.1371/journal.pone.0217989. PMID: 31188858

２０１９年６月：論文発表 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=PMID%3A+31194962

論文名：ヒトコブラクダに感染している原虫とトリコストロンギルス属線虫の分子同定

ラクダに感染する寄生虫の多様性についてはほとんど分かっていないのが現状で、一般的には形態学的な解析がなされています。今回、エジプトのヒトコブラクダ由来の心臓組織と糞便からDNAを抽出し、寄生虫の検査を行いました。PCR検査の結果、Toxoplasma gondii (1.1%)、Sarcocystis spp. (64.4%)、Cryptosporidium spp. (5.9%)、Trichostrongylidae nematodes (22.7%)の感染が確認されました。線虫の中では、Haemonchus spp. (95.6%)、Trichostrongylus axei (26%)、Trichostrongylus colubriformis (65.2%)、Cooperia oncophora (60.8%)の感染が認められました。今回の結果により、ヒトコブラクダには様々な種類の寄生虫が感染していることが明らかになりました。本研究はMansoura大学獣医学部（エジプト）との共同研究の成果です。

El-Alfy ES, Abu-Elwafa S, Abbas I, Al-Araby M, Al-Kappany Y, Umeda K, Nishikawa Y. 

Molecular screening approach to identify protozoan and trichostrongylid parasites infecting one-humped camels (Camelus dromedarius). 

Acta Trop. 2019 Jun 10:105060. doi: 10.1016/j.actatropica.2019.105060. [Epub ahead of print] PMID: 31194962

２０１９年４月：論文発表 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=PMID%3A+31437553

論文名：モンゴルの土壌サンプルから分離された放線菌を用いた抗原虫活性を有する化合物の同定と解析

天然生物資源は感染症に対する様々な治療薬の源になっており、その中でも放線菌は土壌や海に存在しています。本研究ではモンゴルの土壌サンプルから分離された４種類の放線菌を用いて、抗原虫活性の解析を行いました。その中で、Streptomyces canus N25株の粗抽出サンプルに抗トキソプラズマ活性と抗マラリア活性があることが明らかとなりました。高分解能LC/MSを用いた解析により活性画分からphenazine-1-carboxylic acid（PCA）を同定し、トキソプラズマ（IC50: 55.5 µg/ml）および熱帯熱マラリア原虫（IC50: 6.4 µg/ml）に対する増殖阻害効果を確認しました。本研究により、モンゴルでの土壌放線菌は抗原虫薬の有望な生物資源であることが示唆され、PCAの今後の詳細な解析が期待されます。本研究は微生物化学研究所との共同研究の成果であり、寿原記念財団の研究助成で実施しました。

Pagmadulam B, Tserendulam D, Rentsenkhand T, Igarashi M, Sawa R, Nihei CI, Nishikawa Y. 

Isolation and characterization of antiprotozoal compound-producing Streptomyces species from Mongolian soils. 

Parasitol Int. 2019 Aug 19;74:101961. doi: 10.1016/j.parint.2019.101961. PMID: 31437553

２０１９年４月：論文発表 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S138357691830165X?via%3Dihub

論文名：ウシにおけるクリプトスポリジム・パルバム特異抗体を検出するためのCpGP15組換え抗原の作製

子牛におけるクリプトスポリジム・パルバム（Cryptosporidium parvum）の感染は激しい下痢症を引き起こし発育不良につながることから、経済的損失が大きい疾患です。本疾病対策には早期診断による衛生管理が必須であり、汚染地域を把握するためには血清疫学調査が有効です。これまでにCpP23が診断用抗原として知られていますが、実際の感染牛に対する反応性が認められな場合も存在していました。そこで本研究では有用な診断用抗原の同定を目的に、CpP23に加えてCpGP15, CpP2 そしてCpGP60についてELISAによる抗原性の比較解析を行いました。CpP23 とCpGP15はクリプトスポリジム・パルバム感染の標準牛血清に対し優れた反応性を示し、２つの抗原の結果を組み合わせると特異性が100%に上昇しました。今回の結果は野外血清サンプルを用いた解析の際に疑陰性の可能性を回避できることになり、CpP23 とCpGP15を用いたELISAによる農場の検査の有用性を示唆しています。本研究結果はエジプト・South Valley大学などとの共同研究の成果であり、一部は帯広畜産大学原虫病研究センター共同研究経費（27-joint-2, 28-joint-6）、基盤研究（B）（海外学術調査）（文部科学省：26304037)、研究成果最適展開支援プログラム A-STEP（科学技術振興機構：AS242Z03137P）の研究助成で実施しました。

Ichikawa-Seki M, Fereig RM, Masatani T, Kinami A, Takahashi Y, Kida K, Nishikawa Y.

２０１９年３月：論文発表 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304401719300457?via%3Dihub

論文名：免疫活性化能を有するネオスポラGRA6はネオスポラ感染に対する防御免疫を誘導する

牛ネオスポラ症の対策にはコストの面からもワクチン開発が重要とされていますが、現在市販されているワクチンはありません。今回、新しいワクチン開発戦略の一つとして免疫活性化能を有するタンパク質を用いたサブユニットワクチンの検証を行いました。ネオスポラ（Neospora caninum）のデンスグラニュルタンパク質６（NcGRA6）をマウスマクロファージに作用させると、炎症性サイトカインIL-12の産生を誘導しました。そこでNcGRA6の免疫活性化能に着目し、アジュバントを使用することなくNcGRA6の単独免疫で感染防御効果を得ることに成功しました。NcGRA6の免疫により抗原特異的な抗体産生と細胞性免疫を誘導することが可能で、マウスの感染実験において90%以上のマウスが生存する結果を示しました（コントロールの生存率は16.7%）。従って、NcGRA6はネオスポラのワクチン開発に有望な抗原であることが示されました。本研究結果はエジプト・South Valley大学との共同研究の成果であり、一部は基盤研究（B）（一般）（日本学術振興会：15H04589, 18H02335)の研究助成で実施しました。

Fereig RM, Shimoda N, Abdelbaky HH, Kuroda Y, Nishikawa Y.

２０１９年２月：論文発表 https://link.springer.com/article/10.2478%2Fs11686-019-00036-w

論文名：タイ薬草エタノール抽出物のマラリア原虫とトキソプラズマに対する増殖抑制効果の検証

タイでは健康のために伝統的な薬草が使われています。本研究では７種類のタイの薬草からエタノール抽出エキスを調整し、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）とトキソプラズマ（Toxoplasma gondii）に対する薬効を培養試験で評価しました。K. parviflora, P. palatiferum と A. muricataの抽出エキスは熱帯熱マラリア原虫に対し効果を示し、K. parviflora と M. sapientum (ripe fruit peel) の抽出エキスはトキソプラズマの増殖を阻害しました。今回の結果はタイの薬草は抗原虫薬の創薬シーズになる可能性を示しています。本研究はタイ・マヒドン大学獣医学部との共同研究であり、一部は寿原記念財団の研究助成により実施しました。

Leesombun A, Boonmasawai S, Nishikawa Y.

Ethanol Extracts from Thai Plants have Anti-Plasmodium and Anti-Toxoplasma Activities In Vitro.

Acta Parasitol. 2019 Feb 28. doi: 10.2478/s11686-019-00036-w. 

PMID: 30820881

２０１９年２月：論文発表 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0264410X19300362?via%3Dihub

論文名：サイクロフィリン封入オリゴ糖リポソームはTLR2依存的にネオスポラ感染に対する防御免疫を誘導する

ネオスポラ（Neospora caninum）はウシの流産を引き起こす病原性原虫です。ネオスポラの蔓延は畜産業に経済的損失をもたらしますが、ワクチンや治療薬などは開発されていません。我々のこれまでの研究により、ワクチン抗原をオリゴ糖リポソーム内へ封入することで効果的な防御免疫を誘導できることが明らかとなっています。今回、ネオスポラのサイクロフィリンを封入したオリゴ糖リポソーム（NcCyp-OML）を作製し、ワクチン効果を検証しました。NcCyp-OMLをマクロファージに作用させるとNF-κBを活性化し、炎症性サイトカインIL-12の産生を促進させるました。NcCyp-OMLの免疫により抗原特異的な抗体産生と細胞性免疫を誘導することが可能で、マウスの感染実験において感染マウスの生存率を優位に向上させました。このワクチン効果はToll様受容体2（TLR2）欠損マウスでは認められなかったことから、NcCyp-OMLの効果を発揮させるためにはTLR2が必要であることが明らかとなりました。今回の結果は、ネオスポラのワクチン開発にはTLR2依存的な免疫誘導が重要であることを示しています。本研究結果はエジプト・South Valley大学との共同研究の成果であり、一部は基盤研究（B）（一般）（日本学術振興会：15H04589, 18H02335)の研究助成で実施しました。

Fereig RM, Abdelbaky HH, Kuroda Y, Nishikawa Y.

２０１９年２月：論文発表 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1383576918301612?via%3Dihub

論文名：日本で飼育されているリスザルでのトキソプラズマ症の流行事例

新世界ザルへのトキソプラズマの感染は致死的であり、リスザルにおけるトキソプラズマ症の流行事例が多数報告されています。今回、日本で飼育されているリスザルの死亡例からトキソプラズマ症を同定しました。病理組織学的検査により全身臓器に原虫が認められ、肺水腫と診断しました。感染個体の脳組織から乳剤を作製し、免疫不全マウスへ接種することで原虫株の分離に成功しました。分離株の遺伝子多型解析を行い、タイプII型と一部タイプI型の遺伝子マーカーが検出されました。マウスの病原性試験の結果、標準のタイプII（PLK株）と比較して分離株の病原性の低下が認められました。今回の結果は、日本で初のリスザル由来分離株の解析結果となります。本研究結果はおびひろ動物園、エジプト・South Valley大学、Mansoura大学との共同研究の成果であり、一部は最先端・次世代研究開発支援プログラム（日本学術振興会：2011/LS003）、新興・再興感染症に対する革新的医薬品等開発推進研究事業（AMED、JP18fk0108010)の研究助成で実施しました。

Nishimura M, Goyama T, Tomikawa S, Fereig RM, El-Alfy EN, Nagamune K, Kobayashi Y, Nishikawa Y.

サムラトランギ大学動物科学部長との記念撮影

右から、Sri  Adiani博士（Head of Laboratory of Reproduction, Breeding and Animal Health、西川義文准教授、Charles L. Kaunang教授（Dean）

平成２７年１月：論文発表  http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25628099

細胞内のトキソプラズマを殺傷する新たなメカニズムとして、インターフェロン・ベータ依存的なimmunity-related GTPaseの役割を明らかにしました。本論文発表は、最先端・次世代研究開発支援プログラム（日本学術振興会, 2011/LS003）の研究成果です。

Mahmoud ME, Ui F, Salman D, Nishimura M, Nishikawa Y*. 

Mechanisms of interferon-beta-induced inhibition of Toxoplasma gondii growth in murine macrophages and embryonic fibroblasts: role of immunity-related GTPase M1 (IRGM1). 

Cell Microbiol. 2015 Jan 28. doi: 10.1111/cmi.12423. [Epub ahead of print] *Corresponding author

平成２７年１月：論文発表  http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25604996

ネオスポラ感染マウスの脳組織を用いて、脳内の全遺伝子を対象にしたトランスクリプトームと病理組織学的解析を行いました。感染脳組織では神経系の質的な破綻が示唆されました。本論文発表は、最先端・次世代研究開発支援プログラム（日本学術振興会, 2011/LS003）の研究成果です。

Nishimura M, Tanaka S, Ihara F, Muroi Y, Yamagishi J, Furuoka H, Suzuki Y, Nishikawa Y*. 

Transcriptome and Histopathological Changes in Mouse Brain Infected with Neospora caninum. 

Sci Rep. 2015 Jan 21;5:7936. doi: 10.1038/srep07936. *Corresponding author

平成２７年１月：論文発表  http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25558986

ケモカイン受容体CCR5はネオスポラ感染の防御免疫に必要であり、本受容体の欠損によりネオスポラの神経症状の発症が増加することが明らかとなりました。本論文発表は、最先端・次世代研究開発支援プログラム（日本学術振興会, 2011/LS003）の研究成果です。

Abe C, Tanaka S, Nishimura M, Ihara F, Xuan X, Nishikawa Y*. 

Role of the chemokine receptor CCR5-dependent host defense system in Neospora caninum infections. 

Parasit Vectors. 2015 Jan 6;8(1):5. [Epub ahead of print] *Corresponding author

平成２６年１１月：論文発表 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25481361

北海道と沖縄の農場で検出したクリプトスポリジウム・パルバムは、遺伝型が同一で人獣共通型であることが明らかとなりました。

Ichikawa-Seki M, Aita J, Masatani T, Suzuki M, Nitta Y, Tamayose G, Iso T, Suganuma K, Fujiwara T, Matsuyama K, Niikura T, Yokoyama N, Suzuki H, Yamakawa K, Inokuma H, Itagaki T, Zakimi S, Nishikawa Y*. 

Molecular characterization of Cryptosporidium parvum from two different Japanese prefectures, Okinawa and Hokkaido. 

Parasitol Int. 2014 Dec 3;64(2):161-166. doi: 10.1016/j.parint.2014.11.007. [Epub ahead of print] *Corresponding author

平成２６年１１月：論文発表 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25373617

マラリア用のワクチンを開発するために、ワクチン抗原をオリゴ糖リポソームへ封入し、マウスの感染モデルでワクチンとしての有効性を確認しました。本論文発表は、最先端・次世代研究開発支援プログラム（日本学術振興会, 2011/LS003）の研究成果です。

Terkawi MA, Kuroda Y, Fukumoto S, Tanaka S, Kojima N, Nishikawa Y*  

Plasmodium berghei circumsporozoite protein encapsulated in oligomannose-coated liposomes confers protection against sporozoite infection in mice.

Malar J. 2014 Nov 5;13(1):426. doi: 10.1186/1475-2875-13-426.*Corresponding author

平成２６年６月２９日：テレビ番組出演

6月29日（日）深夜のＴＢＳテレビ「別冊アサ（秘）ジャーナル」で本学が紹介されました。 「別冊アサ（秘）ジャーナル」は、2001年からスタートし、浅草キッド（水道橋博士・玉袋筋太郎）、江口ともみさんの3人が、日本の森羅万象を徹底取材するTBSの名物深夜番組です。2013年春からは、「別冊アサ（秘）ジャーナル・ニッポン学校最前線」として新しいテーマ『学校』を取材しており、このたび本学が紹介されまた。

http://www.tbs.co.jp/asa-j/index-j.html#midokoro

下記URLで番組が見られます（私は番組最後に少しだけ出演しました。）。

http://www.tudou.com/programs/view/jDS_KqF_LGo/

平成２６年４月１５日：プレスリリース

【リリース概要】

国立大学法人帯広畜産大学原虫病研究センター 准教授 西川 義文、東海大学工学部生命化学科 講師 黒田 泰弘らの研究グループは、この度マラリア原虫とトキソプラズマの感染を制御可能なワクチンの作製に成功しました。

【研究の背景】

単一の真核細胞で構成される原虫は、ヒトを含めた様々な哺乳動物に感染し、重篤な症状を引き起こすものが存在します。世界的によく知られているものでは、ヒトに感染するマラリア原虫などが挙げられます。また、トキソプラズマはヒトと動物に感染し病気を引き起こします。これら原虫の感染に伴う疾患は、医学、獣医・公衆衛生領域で重要視されているにも関わらず未だ有効なワクチンが確立されていません。

【本研究成果が社会に与える影響（本研究成果の意義）】

今回作製に成功したワクチンは、マウスの実験モデルでその効果が確認されたことから、今後のワクチン開発の実用化につながる成果といえます。2010年のマラリア患者数はアフリカを中心に約2億1600万人に上り、推定655,000人が死亡しています（2011年 世界マラリア・レポート）。また、トキソプラズマは先進国でも感染が確認されており、世界人口の30〜60％が感染していると報告されています。特にトキソプラズマの妊婦への感染は日本でも問題となっています。今後のさらなる研究により、これら原虫病の予防ワクチンの実用化を達成することで人類の健康に大きく貢献することが期待されます。

【参考論文】

1. Tanaka S, Kuroda Y, Ihara F, Nishimura M, Hiasa J, Kojima N, Nishikawa Y*. 

Vaccination with profilin encapsulated in oligomannose-coated liposomes induces significant protective immunity against Toxoplasma gondii. 

Vaccine.2014 Apr 1;32(16):1781-1785. *Corresponding author

2.Terkawi MA, Kuroda Y, Fukumoto S, Tanaka S, Kojima N, Nishikawa Y*  

Plasmodium berghei circumsporozoite protein encapsulated in oligomannose-coated liposomes confers protection against sporozoite infection in mice.

Malar J. 2014 Nov 5;13(1):426. doi: 10.1186/1475-2875-13-426.*Corresponding author

十勝毎日新聞記事掲載（2014年4月23日）、北海道新聞記事掲載（2014年4月23日）、日経産業新聞記事掲載（2014年4月24日）、科学新聞（2014年5月16日）

平成２６年５月：論文発表 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24885547

トキソプラズマ原虫のステージ変換は、宿主のリポ蛋白質の枯渇により誘導されることを明らかにしました。

Ihara F, Nishikawa Y*. 

Starvation of low-density lipoprotein-derived cholesterol induces bradyzoite conversion in Toxoplasma gondii. 

Parasit Vectors. 2014 May 29;7(1):248. doi: 10.1186/1756-3305-7-248. *Corresponding author

平成２６年５月：論文発表 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24661782

平成２５年１０月：論文発表 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23856619