Embedded Files
Η Ερευνητική δραστηριότητα, τα 40 χρόνια που υπηρετώ την Επιστήμη, εστιάσθηκε προς δύο κύριες κατευθύνσεις:
Στην μελέτη του ενζύμου ΝΤΟΠΑ αποκαρβοξυλάση. Ένα ένζυμο που στα μέσα του προηγούμενου αιώνα εθεωρείτο ως άνευ ιδιαίτερης σημασίας, καθαρίσθηκε σε ομογενή μορφή από την λευκή νύμφη του εντόμου Calliphora vicina αλλά αργότερα και από άλλους ιστούς, λευκή νύμφη από Ceratitis capitata, ανθρώπινο νεφρό που λαμβανόταν μετά θάνατο. Μελετήθηκαν οι ιδιότητες του ενζύμου και απομονωνόταν από τους διάφορους ιστούς. Απομονώθηκε το μήνυμα που κωδικοποιούσε για την συγκεκριμένη πρωτεΐνη, μεταφράσθηκε σε in vitro συστήματα συνετέθη το cDNA κλωνοποιήθηκε και μελετήθηκε η μεταμεταγραφική ωρίμανση του μεταγράφου, για την δημιουργία του ενεργού μηνύματος. Εκφράσθηκε το γονίδιο in vitro και προσδιορίσθηκε η ενζυμική του ενεργότητα.
Μελετήθηκε ακόμη η παρουσία του ενζύμου σε μεμβράνες πού απομονωνόταν από ιστούς εντόμων και μελετήθηκε ο τρόπος που βρίσκεται διευθετημένο στις μεμβράνες και πιθανοί μηχανισμοί εκχύλισης.
Διερευνήθηκε ο μηχανισμός απενεργοποίησης της ενζυμικής ενεργότητας σε διάφορους ιστούς και καθαρίσθηκαν αναστολείς του ένζυμου οι οποίοι ελέγχουν την ενεργότητά του.
Μελετήθηκε το ένζυμο σε διάφορους τύπους καρκίνου όπως ο καρκίνος του προστάτη, ο καρκίνος του παχέως εντέρου και γίνεται προσπάθεια συνέχισης της ποσότητος του μηνύματος με το στάδιο του όγκου αλλά και της ανταπόκρισης των καρκινικών κυττάρων σε διάφορα χημειοθεραπευτικά.
Σε μία δεύτερη κατεύθυνση έγινε προσπάθεια να εντοπισθούν παράγοντες οι οποίοι ελέγχουν την μεταφραστική ρύθμιση.
Μελετήθηκαν ριβοσωμικές πρωτεΐνες που απομονωνόταν από τα διάφορα στάδια ανάπτυξης του ωοθυλακίου του μεταξοσκώληκα αλλά και από τα διάφορα στάδια ανάπτυξης του εντόμου Ceratitis capitata και εντοπίσθηκαν οι διαφορές. Απομονώθηκαν, καθαρίστηκαν σε ομογενή μορφή, εξειδικευμένες ριβονουκλεάσες με υψηλή ειδικότητα υποστρώματος. Από διάφορους ιστούς, ζυμομύκητες, έντομα, καθαρίσθηκαν σε ομογενή μορφή, απομονώθηκε το mRNA, απομονώθηκε και αλληλουχήθηκε το cDNA και εκφράσθηκε σε ευκαρυωτικά κύτταρα.
Ερευνητικά Ενδιαφέροντα
Μελέτη του ενζύμου L- Ντόπα Αποκαρβοξυλάση (DDC) από λευκή και μαύρη νύμφη του εντόμου Ceratitis capitata ανθρώπινο ιστό, χρωμιόφιλα κύτταρα και καρκινικά κύτταρα νευροεκκριτικής προέλευσης. Μελέτη της τοπολογίας του ενζύμου DDC σε νευρικά κύτταρα θηλαστικών.
Μελέτη της σύνθεσης της L-Ντόπα Αποκαρβο-ξυλάσης από την δεύτερη κορυφή ενεργότητας κατά την διάρκεια της ανάπτυξης του εντόμου Ceratitis capitata.
Παρασκευή του cDNA που κωδικοποιεί την DDC και έκφραση του cDNA σε κύτταρα θηλαστικών.
Χαρακτηρισμός μίας ειδικής poly(U)poly(C) ριβονουκλεάσης από διάφορα αναπτυξιακά στάδια του εντόμου Ceratitis capitata , του ζυμομύκητα Saccharomyces cerevisiae , και από ανθρώπινο ιστό. Μελέτη του τρόπου δράσης της ριβονουκλεάσης σε διάφορα στάδια πρωτεϊνοσύνθεσης και του ρόλου της στον έλεγχο της πρωτεϊνοσύνθεσης.
Ανίχνευση mRNA Ddc χρησιμοποιώντας ιχνηθέτη αλληλουχία των cDNA μορίων.
Συσχέτιση της βιοσύνθεσης και του τίτλου του μηνύματος Ddc και των εναλλακτικών μορφών με την παραγωγή ινσουλίνης.
Έρευνες σε Εξέλιξη
Τα τρέχοντα ερευνητικά ενδιαφέροντα εστιάζονται κύρια σε τρεις κατευθύνσεις.
Στην πρώτη κατεύθυνση εξακολουθεί να μελετάται ο τρόπος δράσης της ΝΤΟΠΑ αποκαρβοξυλάσης.
Με ανασυνδυασμένα in vitro συστήματα γίνεται προσπάθεια:
Να μελετηθεί ο ρόλος της 5’ μη μεταφραζόμενης περιοχής που απομονώνεται από δύο διαφορετικούς τύπους RNA στην μετάφραση του μηνύματος.
Nα διερευνηθούν μηχανισμοί μεταγωγής σήματος που επάγονται μετά την επιλεκτική απελευθέρωση του ενζύμου από την μεμβράνη όπου έχει δειχθεί ότι ευρίσκεται ενσωματωμένη.
Στην δεύτερη κατεύθυνση γίνεται προσπάθεια:
Να εντοπισθεί το ένζυμο σε διάφορους τύπους καρκίνου, καθώς και η συγκέντρωση του μηνύματος για την συγκεκριμένη πρωτεΐνη.
Να διερευνηθεί η επίδραση την οποία ασκούν στην διαδικασία της μετάφρασης του συγκεκριμένου μηνύματος στους συγκεκριμένους όγκους τα διάφορα αντικαρκινικά φάρμακα.
Να εντοπισθεί συσχέτιση της συγκέντρωσης του μηνύματος για την Ddc με τν παραγόμενη ινσουλίνη τόσο σε διαβητικούς ασθενείς όσο και σε κυτταρικές σειρές που υπερκφράζουν την ινσουλίνη.
Στην τρίτη κατεύθυνση εντάσσεται η μελέτη μιας νέας οικογένειας ριβονουκλεασών που ανακαλύφθηκε στο εργαστήριο μας και ονομάσθηκε Rnase K family. Πιο συγκεκριμένα η μελέτη αυτή εστιάζεται:
Στη λεπτομερή Βιοχημική ανάλυση της RNase Κ που εκφράζεται στο έντομο Ceratitis capitata καθώς και σε ανθρώπινους ιστούς.
Στην ανίχνευση και ταυτοποίηση εναλλακτικών μεταγράφων της RNase K.
Στον προσδιορισμό των επιπέδων έκφρασης της ριβονουκλεάσης αυτής στο έντομο Ceratitis capitata και σε ανθρωπίνους ιστούς.
Page updated
Google Sites
Report abuse