微生物實驗

實驗一、微生物的培養與分析

將微生物接種至固體培養基的方法

• • 分區畫線法

step1:利用接種環經過酒精燈高溫消菌後沾取少量大腸桿菌，在固態培養基上一筆平行線劃開（呈閃電狀）。

step2:再次高溫消菌後同第一步畫上的痕跡，由角落沾取第一步劃上的大腸桿菌並重複第一步動作。

step3:重複第二步動作。

• • 稀釋塗抹法

step1:取用三角玻棒沾取適量酒精後高溫消菌。

step2:利用pipetman取稀釋的混合菌液滴於固態培養基中央。

step3:使用消毒後的三角玻棒將菌液於培養基上塗抹均勻。

將微生物接種於液態培養基的方法

• • 菌落懸浮法

將接種環高溫消菌後沾取適量大腸桿菌。將沾上大腸桿菌的接種環放入液態培養基中輕輕晃動。

心得：每做完一次，都要進行仔細的消毒，雖然步驟繁瑣，但也是在考驗我們的耐心和專注力。

實驗二、細生長的控制

(一)紫外光照射實驗菌

目的:比較曝曬日照（紫外線）長度對大腸桿菌生長之影響。

做法:利用稀釋塗抹法得到三組含大腸桿菌的相同培養基。

第一組曝曬0分鐘，觀察到的菌有477顆

第二組曝曬5分鐘，觀察到的菌有197顆

第三組曝曬20分鐘，觀察到的菌有10顆

根據我們實驗結果顯示，大腸桿菌不適合在陽光下生長。曝曬時長越久，菌數越少。

(二)化學物質感受性實驗

目的:比較不同的化學物質對大腸桿菌生長之影響。

step1:利用稀釋塗抹法得到含大腸桿菌的培養基。

step2:用鑷子夾取1片Ampicillin圓行濾紙貼於培養基上。

step3:鑷子過濾後在夾取4片無菌圓形濾紙貼於培養基上。P.S貼濾紙時要保持適當距離以免影響實驗結果。

step4:在濾紙上滴上不同待測物。

step5:觀察不同待測物對菌種抑制圈之大小影響。

(未標示之濾紙為Amp，是一種青黴素)

實驗三、微生物的染色方法

使用菌種：大腸桿菌(E.coli)、枯草桿菌（B.S)、LP33

熱固定法：在乾淨的玻片中央滴無菌水，再將菌類置入，最後用酒精燈將水烤乾。注意:在烤乾時玻片要來回移動以防玻片受熱不均而破裂。

• • 簡單染色

step1:用熱固定法把E.coli固定於玻片上。

step2:將Crystal violent染劑2滴於玻片上。

step3:用蒸餾水將染劑清洗乾淨。P.S沖洗時不要直接沖洗含菌的位置。

(Ecoli)

• • 負染色

step1:取一小滴Nigrosin染劑於載玻片邊緣。

step2:用tip勾取E.coli放在染劑中混合。

step3:使用另一載玻片邊緣將混合易推平使之由濃變淡。

(E.coli)

• • 革蘭氏染色

step1:將以附有菌種的玻片至於架子上。

step2:以Crystal violent染劑滴於菌體上10秒鐘並用蒸餾水清洗乾淨。

step3:重複step2步驟將碘液滴於菌體上。

step4:重複step2步驟將酒精滴於菌體上。P.S滴酒精時不可直接滴於菌體上。

step5:重複step2步驟將Safranin滴於菌體上。

(E.colI)

(B.S.)

(LP33)

(混和菌E.coli+B.S.)

(混和菌E.coli+LP33)