細胞胞器螢光影像
授課教授:林玉俊
授課教授:林玉俊
綠色螢光蛋白質(GFP)
由維多利亞多管發光水母而來,有特殊官能基團能吸收水母素產生的藍光,並把能量以綠色光線形式釋出,使管水母能變色。
具有 238 個胺基酸,分子量 26,900,能形成啤酒罐狀三級結構。在中央第 65 到 67 號的胺基酸能形成特殊發色團,產生螢光反應。
在細胞內表現時,只需照射藍光或紫外光即可
點突變技術可改變 GFP 基因,使原本綠色的 GFP 轉變為發出青綠色、藍色、黃色等
參考資料來源:https://scitechvista.nat.gov.tw/c/sKDH.htm
綠色螢光蛋白可進行的研究
可進行的研究包含:
外來基因是否成功植入:把 GFP 基因和外來基因放在同一表現載體(vector)上,當宿主細胞開始表現外來基因時,也同時表現 GFP。可透過 GFP 螢光出現與否,得知外來基因是否成功植入標的細胞內。
特定基因的表現:把 GFP 基因和特定基因的啟動子放在同一載體上並植入細胞。由綠色螢光出現的時間和強弱,可判斷基因表現的時間和強度。
蛋白質的位移和交互作用:把研究的基因和 GFP 基因放在同一表現載體上並送入細胞,讓它製造兩種蛋白質複合體。只要看哪裡發亮,就知道此蛋白質移動到何處。若要研究兩種蛋白質是否有交互作用,可把不同顏色的螢光蛋白接在不同蛋白質上,只要兩種顏色重疊,就表示這兩種蛋白質可能有交互作用。
拍攝的活細胞影像
由左方的影片可以觀察到細胞的3D立體透視圖
1.黃色YFP是標記內質網
2.紅色mCherry是標記粒線體
3.藍色CFP是標記高基氏體