Считается, что герб был дарован городу в 1540 королевой польской и великой княгиней литовской Боной Сфорца, однако первые печати с изображением герба Гродно датированы 1565 годом. На них изображён скачущий олень с золотым крестом между рогов, олень Святого Губерта.

Святой Губерт — католический святой, епископ Льежский. Губерт некоторое время жил при дворе франкского короля Теодориха III, потом при дворе Пипина, покровитель охотников. Сам будучи страстным охотником и к тому же смелым человеком Губерт часто пропадал в лесу, однажды во время охоты случилась страшная буря и Губерт отбился от своих товарищей потерявшись в лесной чаще. Надежды на спасение уже не было и Губерт обратился с молитвой к Богу, когда увидел оленя с сияющим крестом между рогами, гордо стоявшего среди деревьев. Следуя за этим оленем, охотник и выбрался из чащобы. Изумленный охотник не отличался благонравностью поведения, однако это знамение настолько поразило его, что он полностью изменил свою жизнь став с тех пор примерным христианином - бедным он раздал всё своё имущество, и, более того, сделал духовную карьеру.

Каждый из элементов геральдического символа имеет свое значение. Даже изгородь, ведь этимология слова относит к таким понятиям, как «городить» или «отгораживать» и созвучна старому названию областного центра – Городень, Гародня.

В контексте гербовой композиции изгородь – это своеобразное изображение самого города. Олень над изгородью символизирует то, что город находится под покровительством святого Гумберта. Он известен, в первую очередь, как покровитель охотников. Почитался в Средние века жителями Гродно, поскольку сразу за городом начинались угодья Гродненской пущи, за ней, самой известной в Беларуси, Беловежской пущи, охота была одним из самых важных занятий для горожан.

С религиозной точки зрения олень с золотым крестом между рогами – символ души человека, обновления и стремления к нравственной чистоте. В мифологии многих народов это животное символизирует поклонение природным силам.