(媲美BIO-RAD TGX FastCast Acrylamide Kit, 快速凝膠試劑組)
1. 使用一般 Tris-Glycine 系統的 Running Buffer 即可!
不需特殊 Running Buffer (如:MOPS、MES等)!成本低廉且方便。
2. 不限制膠體%數,由您自行決定並配製所需之%數!
只需加入 Acrylamide、APS、TEMED (皆需自備) 即可鑄膠,
擁有 Laemmli 分離特性,成本低廉且方便。
(一般建議可配製 8~10% 膠體,其蛋白質分子量較為廣泛!)
3. 堆積膠、分離膠可同時鑄膠!省時省力又方便!
加完下膠後,緩慢均勻加入上膠並插入齒梳等待30分鐘即可完成。
4. Solution 內無添加 SDS,可進行 SDS-PAGE 或 Native PAGE!
以 Running Buffer 內 SDS 的有無來做選擇。
5. 鑄好的膠為中性膠,Acrylamide 較為穩定不易水解!
膠體做好保濕處理,可冷藏一個月保存備用。
6. 跑膠快,解析度好,Transfer 效率好!
特殊成分膠體可承受較高電壓,不易產熱,可加快跑膠速度,且不失解析度。
特殊成分還可以使 Transfer 效率較好,蛋白不易殘留於膠體內。
7. 一片膠不用百元鈔,經濟又實惠!
市面上效能好的膠都不便宜,動不動就破百,或是需要搭配特殊 Buffer,
加一加算下來,小實驗室實在難以負擔,而效能差的甚至也賣到近百元~~
特色:
1. 非蛋白質成分,不影響抗原抗體蛋白質交互作用!
2. 使用脫脂牛奶、BSA等成分時,Band訊號很微弱被遮蓋太多、或是背景太髒……
以上狀況皆可測試使用此Blocking Buffer,或許會有好效果!(不保証,但有機會!與其花大錢買國外non-protein blocking buffer,不如花小錢試試小店產品!)
Western Blot 步驟 (Transfer 完 membrane 後):
1. 加入足以覆蓋 membrane 之體積的 WakandaForData Blocking Buffer,室溫 incubate 30~60分鐘
2. 倒掉 WakandaForData Blocking Buffer
3. TBS-T rinse 3次
4. 加入足以覆蓋 membrane 之體積的 「1級抗體 (in TBST)」 ,4°C incubate 過夜
5. 倒掉或回收 「1級抗體 (in TBST)」
6. TBS-T wash 10分鐘 x3次
7. 加入足以覆蓋 membrane 之體積的 「2級抗體 (in WakandaForData Blocking Buffer)」 ,室溫 incubate 60分鐘
8. 倒掉 「2級抗體 (in WakandaForData Blocking Buffer)」
9. TBS-T wash 10分鐘 x3次
10. ddH2O rinse 3次,洗去Tween-20,即可使用ECL呈色
特色:
1. 隨取隨用,不需加熱步驟!
2. 成份不含β-Mercaptoethanol,不會有難聞的臭味!
步驟:
1. 加入足以覆蓋 membrane 之體積的 Stripping Buffer,室溫 incubate 10分鐘
2. 倒掉 Stripping Buffer
3. 加入足以覆蓋 membrane 之體積的 Stripping Buffer,室溫 incubate 10分鐘
4. 倒掉 Stripping Buffer
5. TBS-T wash 5分鐘
6. TBS-T wash 5分鐘
7. TBS-T wash 5分鐘
8. 抗體剝離完成,可進行 Blocking 步驟