微生物專題

肉眼無法見到的生物體，涵蓋五大類：細菌、原生生物、藻類、病毒、真菌。

1.以接種環由平板培養基上，取出大腸桿菌之單一菌落，置於LB培養液中，注意將接種環上沾有之菌落，完全打入培養液中，並混和均勻。

2.於37度震盪培養箱中培養，隔週觀察細菌生長的情形。

1.以微量吸管吸取0.1ml的大腸桿菌稀釋菌液，滴於LB Plate上

2.取三角玻棒，先置於95%酒精燒杯中，取出過火使酒精燃盡，待玻棒冷卻後，右手持玻棒混和菌液，左手則旋轉LB Plate，將0.1ml的菌液分布均勻於LB Plate上。

3.將菌盤倒放，置於37度培養箱內培養，隔週觀察細菌菌落之形成，同時作為實驗二紫外光照射實驗的對照組。

1.以滅菌接種環挑取大腸桿菌單一菌落，於LB Plate上沿平行線將菌落劃開，此為第一區。

2.將接種環以酒精燒紅，殺死上面沾有之細菌，冷卻後再由劃過之第一區內，沾取少部分之菌落，將Plate輕轉90度，亦以平行線劃開，此為第二區。

3.依同法再由第二區劃出第三區

4.最後一區劃線時，線條盡量拉開，不可太過密集。

5.將菌盤倒放，置於37度培養箱內培養，可得到分散之單一菌落。

實驗記錄

（一）紫外光照射

(一)簡單染色 (Simple staining)

1.使用熱固定法固定大腸桿菌於玻片上。

2.使用結晶紫滴2-3滴於玻片上，靜置一分鐘。

3.在染槽上用蒸餾水洗滌瓶將多餘的染劑沖掉。

4.蓋上蓋玻片，使用顯微鏡觀察菌體的型態和顏色並拍照。

5.使用100X油鏡觀察

1.取一滴Nigrosin染劑於載玻片邊緣

2.使用接種環勾一點E.coli菌體置油染劑中混和均勻。

3.使用另一片乾淨玻片，將染劑與菌體混和液平推，使樣品由濃漸淡。

4.將蓋玻片覆蓋在較淡處，使用顯微鏡觀察菌體並拍照。

1. 將此玻片平放，先以 2% Crystal Violet 染液作用10秒鐘，再以蒸餾水將剩餘染料沖洗去除。

2. 加入 Gram Iodine 媒染劑(Mordant)，作用10秒鐘，用水沖洗。

3. 再以 95%酒精進行脫色作用。作用10秒鐘，用水沖洗。

4. 加入第二種染液 Safranin (Counterstain)，繼續作用10秒鐘後， 用水沖掉多餘之染料，以濾紙吸去玻片上之水份，於顯微鏡以 100 倍油鏡下仔細觀察，並記錄細胞之外形與顏色

1.試述細胞壁構造如何影響格蘭氏染色結果？