目的

微生物體型小，大多是透明無色的，因此透過染色可以讓微生物和背景有所區隔，使微生物的大小、形狀、結構、排列生長等等更容易被觀察。

器具及環境的滅菌

（通常微生物的實驗會在無菌操作台進行，不過因為營隊人數太多，所以我們無法取得無菌操作台的環境）

我們將桌面用酒精擦拭，並且在酒精燈附近進行實驗，利用酒精燈的上升氣流防止空氣中的微生物落入培養基中。

接種環在每次使用前，都會先在酒精燈上加熱至發紅。藍教授的右手食指上有一個烙痕，是教授３０多年前故意用燒紅的接種環燙的，教授說他是在那時決定走上微生物研究的道路，並希望透過這個烙痕提醒學生，做實驗時要小心。

三角玻棒在使用前，會先浸泡95%的酒精，再放在酒精燈上加熱（教授建議我們操作兩次）。這時酒精會燃燒，所以要注意不能倒持玻棒（否則酒精會倒流，會燒到手），也要注意將烤過的玻棒再度浸泡酒精時，玻棒上已經沒有火焰。

常見的幾種方法

（一）細菌之接種法

1.菌落懸浮法：

1）以接種環從平板培養基上，取出大腸桿菌(E. coli)的單一菌落，置於LB培養液中，將接種環上沾有之菌落打入培養液中，並混合均勻。

2）放在37℃震盪培養箱內培養，隔夜後觀察細菌生長之情形。

2.塗抹法(Spreading Method)：

1）使用微量吸管吸取0.1ml之大(pipetman)腸桿菌稀釋液，滴於LB plate上。

2）取三角玻棒沾取95%酒精並過火燃燒使酒精燒盡，待三角玻棒冷卻後，右手持玻棒混勻菌液，左手則旋轉LB plate，務必要將0.1ml之菌液均勻塗抹於LB plate上。

3）將菌盤倒放，置於37℃培養箱內培養（14~16小時），此後觀察細菌菌落之形成。

（二）細菌之分離與純培養-分區畫線法(Streaking Method)

1. 用接種環挑取E. coli單一菌落，於LB上水平化開第一次(不宜太大空間)

2. 接種環過火燒紅。plate轉六十度，劃由第一區沾取少許菌落，再度劃開(第二次)。

3. 接種環再次過火燒紅。同樣方法劃出第三次(線條拉開，不要過於密集)。

4.倒放置於37度培養箱培養。

想想看......

1. 對於很難在實驗室中培養的微生物，可以如何知道或估量其存在？

2. 對於需在高溫下(>>100°C)培養的細菌，可以用什麼方式培養？(用agar做的培養基在高溫下會融化)

ANSWER(非標準答案)：

1. 可以直接透過DNA的分析，估算出有幾種不同的微生物，教授說口腔內微生物(約600種)的數字即是如此估算而來。

2. 可以使用液態的培養基，或是使用其他材質培養。