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Profa. Michelli Gouveia Ramos
Introdução
Introdução
EPF: Método de Willis – Flutuação em solução saturada de Cloreto de Sódio
A técnica de Willis se baseia em duas características dos ovos a serem analisados, sendo a primeira, a densidade, pois corpos menos densos tendem a flutuar sobre uma solução salina densa. Sendo assim, quanto menos densos os ovos, melhor sua separação por meio dessa técnica, que utiliza uma solução saturada de cloreto de sódio de densidade alta para induzir a flutuação dos ovos até a superfície.
Os ovos na superfície entrarão em contato com a face inferior de uma lâmina de vidro, devido à outra característica desses ovos, o tigmotropismo. Corpos com esta propriedade tendem a aderir a superfícies sólidas após um contato físico com elas. Juntando essas duas características, a técnica de Willis permite fixar ovos pouco densos de uma amostra fecal em uma lâmina, por meio de sua flutuação sobre uma solução muito densa. Esses ovos são, então, observados microscopicamente. objetiva 10x.
APLICAÇÃO CLÍNICA: Pesquisa de ovos de helmintos com densidade específica baixa, como os ovos de Ancilostomídeos. Não é recomendado para ovos pesados, ovos de Enterobius vermicularis e ovos inférteis de Ascaris lumbricoides.
PRINCÍPIO DO TESTE: Fundamenta-se na dupla propriedade que apresentam certos ovos de helmintos de flutuarem na superfície de uma solução de densidade elevada, como a solução saturada de cloreto de sódio em água e aderirem ao vidro.
Materiais e
Equipamentos
Materiais e
Equipamentos
Copo descartável
Becker de 100 mL
Palito de madeira
Fezes
Gaze e tesoura
NaCl (densidade 1,200)
Lâmina
Lamínula
Lugol
Tubo Falcon ou Tubo de ensaio
Estante para tubos
POP
POP
Técnica de Willis
Técnica de Willis
Em um pequeno frasco cilíndrico de aproximadamente 2,5 cm de diâmetro com capacidade para 20 mL, diluir cerca de 1 a 2 gramas de fezes em solução saturada de cloreto de sódio;
Suspender as fezes na solução, até completa homogeneização;
Se necessário, realizar a filtração com gaze dobrada ou peneira fina, a fim de remover partículas grosseiras da amostra;
Colocar uma lâmina sobre a boca do frasco e, com pipeta, completar o volume com a referida solução até que a superfície líquida toque a lâmina;
Aguardar 5 a 15 minutos e inverter num movimento rápido a lâmina, adicionar uma gota de lugol e cobrir com uma lamínula que será examinada ao microscópio óptico utilizando objetiva de 10x e 40x.
Figura 1 - Método da técnica de Willis
Fonte: Firstlab ([2023], on-line).
A técnica de Willis é empregada para pesquisa de ovos de Ancilostomídeos, estrutura essa que torna difícil a visualização em outras técnicas de Exame Parasitológico de Fezes. A seguir, encontram-se algumas imagens de ovos de Ancylostoma:
Figura 2 - Ovos de Ancylostoma sp
Fonte: Firstlab ([2023], on-line).
Figura 2 - Ancylostoma duonenale verme adulto
Fonte: Firstlab ([2023], on-line).
Para melhor entendimento a respeito da realização da técnica, assista ao vídeo a seguir:
Na Prática
Na Prática
Verifique seu Aprendizado
Verifique seu Aprendizado
1) O método de Willis é um exame parasitológico de fezes muito utilizado para o diagnóstico de cistos de protozoários e de alguns ovos de helmintos. Assinale a alternativa que representa o princípio deste método:
a) Sedimentam-se espontaneamente em água.
b) Flutuam numa solução concentrada de sulfato de zinco.
c) Flutuam numa solução concentrada de cloreto de sódio.
d) Sedimentam-se numa solução de MIF (mertiolato, iodo e formaldeído).
e) Sedimentam e, após centrifugação, o sedimento é ressuspendido com solução diluída de cloreto de sódio para não causar deformidades nas estruturas parasitárias.
2) Sobre o Método de Willis-Mollay na pesquisa de enteroparasitas, assinale a alternativa correta:
a) Método qualitativo que permite a visualização da morfologia normal dos parasitas. É específico para a pesquisa de trofozoítos de Giardia spp. nas fezes, bem como de proglotes de Dipylidium caninum, ovos de Toxocara spp., Ancylostoma spp. e Trichuris vulpis e oocistos de coccídeos. É um procedimento eficaz apenas nas infestações maciças.
b) Método qualitativo de concentração de ovos de helmintos como Ancylostoma spp., Trichuris vulpis, Toxocara spp., entre outros; e oocistos de coccídios, como Cystoisospora spp. Esse método utiliza o princípio da flutuação simples em solução hipersaturada de cloreto de sódio (NaCl) e baseia-se na propriedade de certos ovos de parasitas flutuarem na superfície de soluções de densidade elevada e de aderirem à lâmina de vidro.
c) Método de Sheater (modificado) é um método qualitativo de concentração principalmente de oocistos de coccídeos, como Cystoisospora spp., Cryptosporidium spp. e cistos de Giardia spp. É um método que utiliza o princípio da centrífugo-flutuação em solução de sacarose com densidade 1.203, e baseia-se na propriedade de certos parasitas flutuarem na superfície de soluções inertes de peso específico mais elevado.
d) É um método qualitativo de concentração de ovos de helmintos, como Ancylostoma spp., Toxocara spp., Trichuris vulpis, entre outros. Também podem ser identificados protozoários como Cystoisospopra spp. e cistos de Giardia spp. Esse método utiliza o princípio da centrífugosedimentação em formol-éter.
e) Método quantitativo que permite a visualização da morfologia normal dos parasitas. É específico para a pesquisa de trofozoítos de Giardia spp. nas fezes, bem como de proglotes de Dipylidium caninum, ovos de Toxocara spp., Ancylostoma spp. e Trichuris vulpis e oocistos de coccídeos. É um procedimento eficaz apenas nas infestações maciças.
Orientação de resposta
Orientação de resposta
1) C.
2) B.
Referências
Referências
FIRSTLAB. Parasitologia Helmintos: Doenças Infecciosas Associadas ao Sistema Digestivo. [2023]. Disponível em: https://firstlab.ind.br/parasitologia-helmintos-doencas-infecciosas-associadas-sistema-digestivo/. Acesso em: 27 abr. 2023.
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