5º SBBMusc - Simpósio Brasileiro de Biologia Muscular

Curso sobre Microscopia óptica

Profs. Dr. Manoel Luis Costa e Cláudia Mermelstein - Instituto de Ciências Biomédicas - Universidade Federal do Rio de Janeiro

Vídeo 1: principais componentes de microscópio óptico invertido.

Video 2: detalhes do condensador, diafragma do condensador e filtros.

Vídeo 3: obturador e filtro de fluorescência.

Video 4: filtro polaróide, saída lateral e superior para câmeras e oculares (com seu controle de foco).

Vídeo 5: ajustes para iluminação de Koehler.

Video 6: uso do charriot para posicionamento

Vídeo 7: ajuste para contraste de fase.

Vídeo 8: ajuste para contraste interferencial (DIC).

Vídeo 9: ajuste para fluorescência.

dia 11/5 : 14-18:00 horas

Curso Microscopia para estudo da biologia muscular

14:00-14:45 introdução à microscopia óptica (resolução, contraste, etc)

14:45-15:30 campo claro (histologia) e quantificação (ImageJ)

15:30-15:45 polarização

15:45-16:15 contraste de fase (vídeo de cultura de células), DIC

16:15-16:30 intervalo

16:30-17:15 fluorescência e imunomarcação

17:15-17:45 confocal

17:45-18:00 super-resolução

14:00-14:45 introdução à microscopia ópticaNoções gerais: histórico, NA, resolução, contrastepráticas: Natureza da luz: http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/wavebasics/index.htmlAmostragem e resolução: https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/digitalimaging/processing/spatialresolution/NA e ângulo de iluminação: Numerical Aperture Light Cones: Interactive TutorialDEMO (Vídeos): partes dos microscópios (Zeiss e Olympus)Partes do microscópio: https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/microassembly/index.htmlAjuste oculares: Köhler Illumination - Eyepiece Diopter Adjustment: Interactive TutorialCaminhos da luz: Transmitted Light Microscopy Optical Pathways: Interactive TutorialAjuste condensador: Köhler Illumination - Condenser and Field Diaphragm Alignment: Interactive TutorialPlanos conjugados ortoscópico e conoscópico: Köhler Illumination - Conjugate Planes: Interactive Tutorial

14:45-15:30 campo claro e quantificação (ImageJ):Histologia de fragmento de músculo: fixação, emblocamento, corteCor (teoria, ajuste)Quantificação pelo ImageJpráticas:site Leica sobre histologia: https://www.leicabiosystems.com/knowledge-pathway/Videos: https://www.youtube.com/watch?v=__D-DE0X0zk, https://www.youtube.com/watch?v=nUjK4n3_1C8Ajuste branco: https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/olympusmicd/digitalimaging/whitebalance/index.html Ajuste iluminação: (http://www.olympusconfocal.com/gfp/software/backgroundsubtraction/background.exe )Imagem composta de histologia: http://www.histo.ufrj.br/LIB/banco.htm ImageJ: https://imagej.nih.gov/ij/, FIJI: https://fiji.sc/ Perfil de linha: https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/digitalimaging/processing/lineintensityscan/index.html Histograma: https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/digitalimaging/processing/histogramstretching/

15:30-15:45 polarização: músculo de peixe-zebraCampo escuro, filtros polaróides, birrefringênciapráticas:Condensador de campo escuro: http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/darkfield/cardioid/index.html Ajuste condensador de campo escuro: http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/darkfield/alignment/index.html Propagação tridimensional da luz: http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/polarizedlight/emwave/index.html Filtros polaróides: https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/polarizedlight/3dpolarized/index.htmlPolarização virtual: https://micro.magnet.fsu.edu/primer/virtual/polarizing/index.html
15:45-16:15 contraste de fase, DIC: Vídeo de cultura de células.práticas:Interferência de ondas: http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/interference/waveinteractions/index.html Contraste de fase (alinhamento aneis): https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/phasecontrast/phasemicroscope/index.htmlFALTA demo Contraste interferencial
16:15-16:30 intervalo
16:30-17:15 fluorescência e imunomarcação Teoria, aspectos práticos (filtros, espectro).Imunofluorescência: protocolo práticas:Exemplos de fluorescência:https://micro.magnet.fsu.edu/primer/virtual/fluorescence/index.html Diagrama de Jablonski: https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/jablonski/lightandcolor/index.htmlCaminhos ópticos na fluorescência:https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/fluorescence/opticalpaths/index.html https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/lightpaths/fluorescence/index.htmlSpectraViewer: https://www.thermofisher.com/br/en/home/life-science/cell-analysis/labeling-chemistry/fluorescence-spectraviewer.html#!/

17:15-17:45 confocal e imunomarcação (whole mount)/animal inteiroTeoria: tipos de confocal.Visualização imagem tridimensional.práticas:Confocal virtual: https://micro.magnet.fsu.edu/primer/virtual/confocal/index.htmlMultifóton:https://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/multiphoton/jablonski/index.htmlhttps://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/multiphoton/excitationregion/index.html

17:45-18:00 super-resoluçãoTeoria: STED, STORM, SR-SIM, SRRF

Outros links interessantes:

Bibliografia:

Microscopia Óptica: fundamentos e Aplicações às Ciências Biomédicas, Editor: Wanderley de Souza, https://www.sbmm.org.br/livros/
Video microscopy - Inoué, Spring, Plenum Press
Fluorescence Microscopy of Living Cells in Culture - Wang, Lansing Taylor, Methods in Cell Biology, 29 - Academic Press
Handbook Of Biological Confocal Microscopy, Editor: James Pawley, Springer Books, https://link.springer.com/book/10.1007/978-0-387-45524-2
Schermelleh L, Heintzmann R, Leonhardt H. A guide to super-resolution fluorescence microscopy. J Cell Biol. 2010 Jul 26;190(2):165-75. https://rupress.org/jcb/article/190/2/165/35915/A-guide-to-super-resolution-fluorescence
Gustafsson N, Culley S, Ashdown G, Owen DM, Pereira PM, Henriques R. Fast live-cell conventional fluorophore nanoscopy with ImageJ through super-resolution radial fluctuations. Nat Commun. 2016 Aug 12;7:12471. https://www.nature.com/articles/ncomms12471.pdf

Page updated

Report abuse