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Introducción.
Introducción.
En este apartado se van a desarrollar diferentes métodos destinados a la identificación cualitativa de determinados azúcares, dependiendo de la estructura y las propiedades que los caractericen.
Prueba de Molisch. El objetivo de este método es identificar azúcares generales en una disolución. Para ello se utiliza el reactivo de Molisch que contiene ácido sulfúrico. Este ácido se encarga de la hidrólisis del enlace glicosídico, generando monosacáridos, y además a la deshidratación de estos compuestos. Esta deshidratación da lugar a diferentes compuestos según la composición del monosacárido: furfural (derivado de las pentosas) e hidroximetil furfural (derivado de las hexosas). A continuación, estos monosacáridos sufrirán una condensación con fenoles, formando un compuesto coloreado característico (púrpura), lo cual nos indica de la presencia de azúcares en esta disolución.
Prueba de Sellivanoff. En este caso, el método es útil para identificar cetosas. Esto ocurre debido a la reacción del hidroximetil furfural con el resorcinol, formando un complejo coloreado (rojo). Este derivado del furfural proviene de la deshidratación de las cetosas en una solución de ácido clorhídrico. En estas condiciones los aldehídos también se deshidratan, pero más lentamente. Además, si en algún azúcar se encuentra alguna cetosa, y está queda libre mediante una hidrólisis ácida, la prueba saldrá positiva.
Prueba de Fehling. Se utiliza para ver si en la disolución existen azúcares reductores, es decir, aquellos cuyo grupo carbonilo se encuentra libre, por lo que puede reaccionar con otros componentes de la disolución. En este caso, este carbonilo participa en una reacción redox donde reduce el Cu2+ a Cu+, quedando él como ácido. Este cobre reducido, forma el óxido cuproso, que en medio alcalino puede precipitar, dando un precipitado de color rojo.
Prueba de Bial. Esta prueba es útil para identificar pentosas. Estas son convertidas a furfural gracias a la deshidratación producida por el ácido clorhídrico. Este furfural, puede reaccionar con el orcinol e iones férricos presentes en el medio mediante una reacción de condensación, produciendo un complejo coloreado verde.
Prueba del Lugol. Este método es útil para la identificación de moléculas de almidón, ya que estas pueden reaccionar con el yodo presente en el Lugol. Este ion va a introducirse en la hélice, y genera un compuesto de color azul oscuro.
Los glúcidos que se van a utilizar durante esta práctica se representan a continuación, junto con algunas de sus características:
Ribosa
- Pentosa
- Aldehído
- Monosacárido
Glucosa
- Hexosa
- Aldehído
- Monosacárido
Galactosa
- Hexosa
- Aldehído
- Monosacárido
Fructosa
- Hexosa
- Cetona
- Monosacárido
Sacarosa
- Dos hexosas
- Un aldehído (glucosa) y una cetona (fructosa)
- Disacárido
Lactosa
- Dos hexosas.
- Dos aldehídos (glucosa y galactosa)
- Disacárido
Almidón
- Hexosas
- Aldehidos (glucosa)
- Polisacárido
Objetivos
Objetivos
- Conocer diferentes test para la identificación de glúcidos.
- Aprender diferentes propiedades de los glúcidos más importantes.
- Comprensión de diferentes términos utilizados durante la práctica.
Materiales
Materiales
- Tubos de ensayo.
- Gradillas.
- Mechero.
- Pipetas de 200 y 1000 ul.
- Agitador de tubos de ensayo/parafina.
- Guantes.
- Campana de gases.
- Reactivo de Molisch (solución de α-naftol al 0.5% (p/v; 0.5g en 100 ml) en etanol absoluto).
- Resorcinol (solución de resorcinol al 0.06% (p/v; 60 mg en 100 ml) en ácido clorhídrico 6N).
- Reactivo de Fehling.
- Solución A de Fehling: Sulfato de cobre 0.28 N (35 g de CuSO4.5H2O en 500 ml de agua destilada).
- Solución B de Fehling: Tartrato sódico-potásico 1.5 N (158 g en 500 ml) en hidróxido potásico 4 N (112 g en 500 ml de agua destilada).
- Orcinol (solución de orcinol al 0.3% (p/v; 0.3g en 100 ml) en ácido clorhídrico concentrado (ρ = 1,19)).
- Lugol (moler en un mortero 50 g de yodo y 100 g de yoduro de potasio, y disolver ambos en agua destilada en un volumen final de 1 L).
- Ácido clorhídrico 1M.
- Soluciones al 1% de: agua destilada, ribosa, glucosa, galactosa, fructosa, lactosa, almidón y sacarosa.
Procedimiento
Procedimiento
PRUEBA DE MOLISCH:
1. Preparar en la gradilla 8 tubos de ensayo.
2. Añadir a cada tubo 1 ml de las soluciones preparadas: agua, glucosa, galactosa, fructosa, sacarosa, lactosa y almidón.
3. Añadir a cada tubo dos gotas de la solución de α-naftol y agitar utilizando la parafina.
4. Añadir 2 ml de ácido sulfúrico concentrado a cada tubo en la campana de gases.
5. Observar la aparición de color en cada tubo, y en qué tiempo aparece dicho color en cada tubo. Anotar en la tabla dada si aparece color o no.
PRUEBA DE SELLIVANOFF:
1. Preparar en la gradilla 8 tubos de ensayo.
2. Añadir a cada tubo 3 ml de la solución de resorcinol preparada anteriormente.
3. A continuación, añadir 100 ul de las soluciones problema: agua, glucosa, galactosa, fructosa, sacarosa, lactosa y almidón. Mezclar bien utilizando parafina.
4. Observar la aparición de color en cada tubo, y en qué tiempo aparece dicho color en cada tubo. Anotar en la tabla dada si aparece color o no.
PRUEBA DE FEHLING:
1. Preparar en la gradilla 8 tubos de ensayo.
2. Preparar el reactivo de Fehling añadiendo en un tubo Falcon 10 ml del reactivo Fehling A y otros 10 ml del Fehling B.
3. En cada tubo de ensayo añadir 2 ml de la solución problema: agua, glucosa, galactosa, fructosa, sacarosa, lactosa y almidón.
4. Añadir 5 gotas del reactivo de Fehling preparado en el tubo Falcon a cada tubo, y mezclar bien utilizando parafina.
5. Observar la aparición de color en cada tubo, y en qué tiempo aparece dicho color en cada tubo. Anotar en la tabla dada si aparece color o no.
PRUEBA DE BIAL:
1. Preparar en la gradilla 8 tubos de ensayo.
2. En cada tubo, añadir 1 ml de la solución problema: agua, glucosa, galactosa, fructosa, sacarosa, lactosa y almidón.
3. Añadir 3 ml de la solución de orcinol preparada anteriormente y mezclar bien utilizando parafina.
4. Observar la aparición de color en cada tubo, y en qué tiempo aparece dicho color en cada tubo. Anotar en la tabla dada si aparece color o no.
PRUEBA DEL LUGOL:
1. Preparar en la gradilla 8 tubos de ensayo.
2. En cada tubo, añadir 2 ml de la solución problema: agua, glucosa, galactosa, fructosa, sacarosa, lactosa y almidón.
3. Añadir con un cuentagotas 5 gotas de la solución de HCl para acidificar la disolución.
4. A continuación, utilizando de nuevo un cuentagotas añadir 1 gota del reactivo Lugol preparado anteriormente, y mezclar bien utilizando parafina.
5. Observar la aparición de un anillo rojo violeta en la interfase en cada tubo, y en qué tiempo aparece dicho color en cada tubo. Anotar en la tabla dada si aparece color o no.
Resultados esperados
Resultados esperados
A continuación, se muestra una tabla con los resultados esperados de las distintas pruebas realizadas.
Prueba de Molisch:
Esta prueba es positiva en todas las muestras excepto en la muestra de agua, ya que aquí no hay presente ningún glúcido. Esta muestra de agua va a dar negativo en todas las pruebas debido a que no hay glúcidos, solo se utiliza como control negativo (para comprobar que los reactivos están bien preparados).
Prueba de Seliwanoff:
En esta prueba deberían dar positivo las muestras de fructosa, ya que es una cetosa, y la de sacarosa. Esto es debido a que este disacárido está formado por glucosa y por fructosa, que al ser una cetosa, puede dar positivo en la muestra. El resto no dan resultado positivo debido a que están formados por aldosas.
Prueba de Fehling:
Esta prueba solo deberían dar positivos aquellos azúcares reductores como los monosacáridos (ribosa, glucosa, fructosa) y algún disacárido (lactosa). El resto no son reductores debido a que no tienen ningún grupo carbonilo libre.
Prueba de Bial:
En esta prueba solo debería dar positivo la ribosa, pues es el único compuesto de todos los monosacáridos presentes en las muestras que posee 5 carbonos.
Prueba de Lugol:
Esta prueba es específica del almidón, por lo que sólo debería de dar positivo en dicha muestra.
Cuestiones
Cuestiones
Referencias
Referencias
Abril Díaz, N., Jorrín Novo, J. and Bárcena Ruíz, J. (2019). Reacciones coloreadas para la determinación cualitativa de azúcares. Dep. de Bioquímica y Biología Molecular, Edificio C-6 (Severo Ochoa), Campus de Rabanales, Universidad de Córdoba,14071 Córdoba, España.
https://www.khanacademy.org/science/biology/macromolecules/modal/a/lipids
https://www.britannica.com/science/biomolecule
https://www.academia.edu/8034474/Identificaci%C3%B3n_de_carbohidratos
Essays, UK. (November 2018). Role and Types of Biomolecules in the Human Body. Retrieved from https://www.ukessays.com/essays/biology/biomolecules-and-its-coordination-in-human-body-biology-essay.php?vref=1
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