O objetivo da aula é analisar a concentração da ureia circulante, uma vez que este metabólito é formado pelo metabolismo de proteínas em que ocorre a liberação de amônia, sendo convertida em ureia pelo fígado.
Sua dosagem pode ser um indicativo de lesão renal ou hepática. A lesão renal provoca uma retenção de substâncias tóxicas como a ureia por meio de distúrbios da filtração, reabsorção, secreção e excreção. Na lesão hepática, haverá uma diminuição da conversão de amônia em ureia causando uma hiperamonemia.
A ureia é hidrolisada pela urease em íons amônia e CO₂ em meio alcalino, os íons amônia reagem com salicilato e hipoclorito de sódio, sob a ação catalisadora do nitroprussiato de sódio, para formar indofenol. A absorbância do complexo azul formado, medida em 600 nm, é diretamente proporcional à concentração de ureia na amostra analisada. Um aumento na taxa de ureia sanguínea pode ser observado em dietas ricas em proteínas, insuficiência cardíaca congestiva, nefrite, insuficiência renal aguda, carcinomas do trato urinário ou com a idade. As causas renais de elevação da ureia são nefrites, pielonefrites e insuficiência renal aguda ou crônica. As causas pós-renais são obstruções no trato urinário (cálculos ou carcinomas).
Amostra biológica fresca ou centrifugada;
Luvas;
Tubo a vácuo;
Centrífuga;
Ependorf;
Micropipetas 10μL e 1000μL;
Kit Ureia Enzimático-Colorimétrico;
Béquer 25mL;
Estante Micropipetas;
Ponteira para Micropipetas;
Banho Maria - a 37 ºC;
Cronômetro;
Aparelho Espectrofotômetro;
Descarte com parede rígida;
EPIs: Avental, Máscara, Luvas descartáveis.
Padrão
Tampão
Urease
Oxidante
Analito estável por 7 dias quando conservada na temperatura entre 2-8ºC.
Identificar 3 tubos de ensaio “Branco”, “Teste” e “Padrão” e proceder:
Homogeneizar e incubar os tubos por 5 minutos a 37º C e, em seguida, adicionar aos tubos 1000 μL Oxidante de Uso. 4 - Homogeneizar e incubar os tubos por 5 minutos a 37º C. 5- Fazer as leituras fotométricas do Padrão (AP) e do Teste (AT), zerando o aparelho com o Branco em 600 nm. A cor é estável por 2 horas.
Cálculos através do Fator de Calibração (FC).
CP= Concentração do Padrão = 70 mg/dL
CT= Concentração do Teste em mg/dL
FC = CP÷AP
CT (UREIA) = FC x AT
1) Cálculo do Fator de calibração
FC = CP÷AP
FC = 70 ÷ 0,605
FC = 115,70
PACIENTE 1 🡪 AC – CT (UREIA) = FC x AT 🡪 115,70 x 0,275 = 31,81 dL
PACIENTE 1 🡪 AC – CT (UREIA) = FC x AT 🡪 115,70 x 0,340 = 39,33 dL
PACIENTE 1 🡪 AC – CT (UREIA) = FC x AT 🡪 115,70 x 0,155 = 17,93 dL
PACIENTE 1 🡪 AC – CT (UREIA) = FC x AT 🡪 115,70 x 0,450 = 52,06 dL
Sendo assim
Pacientes 1, 2 e 3 normais.
Paciente 4 – excesso;