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Prof. Esp. Juliana Cogo
Introdução
Introdução
Determinação da gonadotrofina coriônica humana (hCG) em amostras de soro, urina ou plasma humanos por imunocromatografia
Determinação da gonadotrofina coriônica humana (hCG) em amostras de soro, urina ou plasma humanos por imunocromatografia
A gonadotrofina coriônica humana (hCG) é um hormônio glicoproteico composto por duas cadeias (α e β), não covalentemente ligadas. Embora as duas subunidades sejam requeridas para a atividade biológica do hormônio, apenas a subunidade β confere especificidade imunológica.
O hCG é, fisiologicamente, produzido em pequenas quantidades pela pituitária, testículos, fígado e cólon e em grandes quantidades por células do sincíciotrofoblasto da placenta durante a gestação. Na gestação, a sua função é estimular a produção de progesterona e estrógeno pelo corpo lúteo, o que permitirá a manutenção da receptividade uterina para o desenvolvimento do embrião. Está estabelecido, também, que vários tipos de tumores podem produzir o hCG, como câncer testicular e tumores trofoblásticos, levando a um aumento dos seus níveis séricos.
Em mulheres gestantes, a concentração de hCG no soro começa a aumentar entre o sétimo e o 11º dia após a ovulação, o que corresponde ao período entre o 21º e o 25º dia após o último período menstrual. O aumento acontece, de maneira exponencial, durante as primeiras cinco semanas após a implantação do embrião. Dessa forma, após esse período, podemos detectar o seu aumento em maior concentração em amostras de soro, plasma, e, em menores concentrações, na urina.
A determinação de hCG pode ser realizada empregando diferentes técnicas, como: testes imunocromatográficos (teste rápido; qualitativa), aglutinação em látex (semi-quantitativa) e por Elisa ou quimioluminescência (quantitativa).
Na técnica de imunocromatografia, para a detecção qualitativa de hCG, utiliza-se uma membrana com dois anticorpos imobilizados: um anticorpo de captura anti-hCG e um anticorpo controle. A amostra adicionada contendo hCG reage, primeiramente, com um anticorpo conjugado com ouro-coloidal, formando um imunocomplexo antígeno/anticorpo. Essa mistura move-se na membrana por ação capilar em direção aos anticorpos imobilizados, onde o imunocomplexo se liga ao anticorpo de captura formando uma banda cor de rosa. A mistura continua fluindo até a região controle onde os anticorpos conjugados não ligados são capturados formando a segunda banda cor de rosa.
Materiais e
Equipamentos
Materiais e
Equipamentos
Luvas.
Tira reativa ou cassete (Labtest; REF: 134).
Cronômetro.
POP
POP
Amostras: soro, plasma ou urina
Urina: deverá ser coletada em um recipiente limpo e seco, preferencialmente, utilizar a primeira urina da manhã (maior concentração de hCG). Poderá ser armazenada entre 2 e 8oC por 48 horas, tomando cuidado para que, no momento da análise, esteja em temperatura ambiente.
Procedimento:
Nota: deixar o dispositivo de teste atingir a temperatura ambiente por 30 minutos (entre 20 e 30°C) antes de usar. O dispositivo de teste deve ser usado em uma hora depois de aberto.
Utilizando a tira reativa
Utilizando a tira reativa
Amostra de Urina
Amostra de Urina
Remover, cuidadosamente, a tira reativa do sachê selado.
Mergulhar a tira reativa na amostra durante oito segundos, tomando cuidado para não deixar a amostra ultrapassar o limite indicado na tira reativa.
Colocar a tira em uma superfície limpa e nivelada.
Acionar o cronômetro e observar o resultado do teste entre três e cinco minutos. Não ler após cinco minutos.
Amostra de Soro ou Plasma
Amostra de Soro ou Plasma
Remover, cuidadosamente, a tira reativa do sachê selado.
Mergulhar a tira reativa na amostra durante dez segundos, tomando cuidado para não deixar a amostra ultrapassar o limite indicado na tira reativa (Figura 1).
Colocar a tira em uma superfície limpa e nivelada.
Acionar o cronômetro e observar o resultado do teste entre cinco e sete minutos. Não ler após sete minutos.
Figura 1 - Pesquisa de hCG em amostra de urina utilizando a técnica de imunocromatografia com tira reativa
Fonte: HCG: teste ([s. d.]).
Utilizando o cassete
Utilizando o cassete
Amostra de Urina
Amostra de Urina
Remover o cassete do sachê selado e colocá-lo em uma superfície limpa e nivelada.
Pipete 100 µL na cavidade de amostra do cassete, evitando a formação de bolhas.
Acionar o cronômetro e observar o resultado do teste entre três e cinco minutos. Não ler após cinco minutos.
Amostra de Soro ou Plasma
Amostra de Soro ou Plasma
Remover o cassete do sachê selado e colocá-lo em uma superfície limpa e nivelada.
Pipete 100 µL na cavidade de amostra do cassete, evitando a formação de bolhas.
Acionar o cronômetro e observar o resultado do teste entre cinco e sete minutos. Não ler após sete minutos.
Figura 2 - Pesquisa de hCG em amostra de urina utilizando a técnica de imunocromatografia com cassete.
Fonte: HCG: teste ([s. d.]).
Leitura e interpretação:
Leitura e interpretação:
Figura 3 - Representação utilizada para a interpretação do resultado obtido na imunocromatografia para a detecção de hCG
Fonte: HCG: teste ([s. d.]).
POSITIVO: duas linhas vermelhas distintas aparecem: uma linha vermelha na região de controle (C) e outra linha vermelha na região de teste (T). Uma linha rosa a vermelha (T), mesmo que muito fina, indica um resultado positivo.
NEGATIVO: uma linha vermelha aparece na região de controle (C). Nenhuma linha aparece na região de teste (T).
INVÁLIDO: nenhuma linha vermelha aparece ou a linha de controle não aparece. Volume de amostra insuficiente ou técnicas de procedimento incorretas são os motivos mais prováveis. Revisar o procedimento e repetir o teste com um novo dispositivo. Se o problema persistir, interromper o uso do kit e entrar em contato com o distribuidor local.
VALOR DE REFERÊNCIA
VALOR DE REFERÊNCIA
O kit de hCG tem uma sensibilidade de 25 mUI/mL.
Nota:
A linha de teste é significativa quando a concentração de hCG é alta, e a linha de controle pode ser fraca. É um fenômeno normal.
Uma série de outras condições, além da gravidez, incluindo câncer uterino, mola hidatiforme ou menopausa, causa níveis elevados de hCG e resultado positivo.
Se, ainda, houver suspeita de gravidez ectópica ou anormal, um diagnóstico de gravidez confirmado deve ser feito por outros métodos.
Se, ainda, houver suspeita de gravidez, uma primeira amostra de urina da manhã deve ser coletada de 48 a 72 horas depois e testada.
Os reagentes devem ser usados o mais rápido possível após abertos. Esse teste não pode ser reutilizado.
O dispositivo de teste deve permanecer nas embalagens lacradas até o uso. Se ocorrer problema de vedação, não teste. Não use após a data de validade.
Um pequeno saco de dessecante está incluso no sachê de alumínio.
Todas as amostras e reagentes devem ser considerados, potencialmente, perigosos e manuseados da mesma maneira que um agente infeccioso após o uso.
Na Prática
Na Prática
Verifique seu Aprendizado
Verifique seu Aprendizado
1) O hormônio Gonadotrofina Coriônica Humana (HCG), também conhecido como hormônio da gravidez, está presente na urina ou no sangue das mulheres grávidas. Sobre o teste de gravidez, ASSINALE a alternativa CORRETA.
a) Para pesquisa de HCG, há apenas um tipo de teste que pode ser realizado empregando amostras de sangue total.
b) Os testes rápidos que podem ser comprados em farmácias são mais sensíveis do que os de laboratórios e possuem valor mais elevado.
c) O teste quantitativo realizado com amostras de soro ou plasma mede a concentração exata de hormônio que está presente na urina.
d) Testes imunocromatográficos utilizando amostras de soro ou plasma podem detectar a presença do hormônio mais cedo na gravidez do que o teste utilizando amostra de urina.
e) O teste imunocromatográfico utilizando amostra de urina pode detectar a gravidez apenas quatro semanas após a ovulação.
2) Heloisa não menstruou na data prevista, então, comprou um teste de gravidez na farmácia próxima de sua residência. Na mesma noite, ao chegar em casa, realizou o teste e este indicou que não estava grávida. Ainda preocupada, Heloisa decide procurar o laboratório de análises clínicas, no qual você é responsável, e realizou uma nova análise. Dessa vez, colheu amostra de sangue, e esta foi utilizada para a análise quantitativa pelo método de quimioluminescência. Para a sua surpresa, o resultado foi positivo.
Com base na história apresentada, FAÇA o que se pede nos itens a seguir:
a) APONTE as principais diferenças entre as técnicas de imunocromatografia e de quimioluminescência.
b) INDIQUE os possíveis motivos que fizeram com que o teste rápido realizado por Heloisa apresentasse resultado negativo.
3) Leia o trecho a seguir:
"A gonadotrofina coriônica humana (hCG) é estruturada pela combinação não covalente de duas subunidades, alfa (alfahCG) e beta (betahCG), sintetizadas separadamente pelo tecido trofoblástico normal, mola hidatiforme, coriocarcinoma, células hipofisárias e tecidos tumorais de diversos tipos histológicos" (MEDEIROS; NORMAN, 2006, [s. p.]).
I - A imagem anterior representa o resultado de um teste de gravidez positivo
PORQUE
II - A intensidade da cor vermelha ou rosa na região da linha de teste (T) varia conforme a concentração de hCG presente na amostra de urina. Entretanto o valor quantitativo e a proporção de aumento do hCG não podem ser determinados por esse teste qualitativo.
A respeito dessas asserções, ASSINALE a alternativa correta.
a) As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa correta da I.
b) As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a I é uma justificativa correta da II.
c) As asserções I e II são proposições falsas, e uma não pode ser a justificativa da outra.
d) A asserção I é uma proposição verdadeira, e a II é falsa.
e) A asserção I é uma proposição falsa, e a II é verdadeira.
Orientação de resposta
Orientação de resposta
1) D.
2)
a) Técnica de imunocromatografia: método rápido, simples e barato que pode ser realizado utilizando diferentes amostras biológicas que permitem a determinação qualitativa. Técnica de quimioluminescência: método automatizando, complexo e de maior custo. É realizado utilizando amostras de sangue que permitem a determinação quantitativa.
b) Os níveis de hCG são menores em amostras de urina do que de sangue. Além disso, ao realizar a análise com a amostra de urina, recomenda-se a utilização da primeira urina da manhã, pois esta apresenta maior concentração desse hormônio.
3) E.
Referências
Referências
HCG: teste. Farmacêutico Responsável José Gilmar Pereira Berto. Lagoa Santa: Labteste, [s. d.]. Instruções de uso de teste.
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