O exame “hemograma” é dividido em eritrograma, leucograma e contagem de plaquetas ou plaquetograma. Dois valores fundamentais e que compõem o eritrograma e a avaliação dos eritrócitos são compreendidos a dosagem de hemoglobina e a determinação do hematócrito. O primeiro permite identificar se o paciente apresenta, ou não, um quadro anêmico, enquanto o segundo avalia a porcentagem de eritrócitos do sangue do paciente.
No interior dos eritrócitos, são encontradas milhões de moléculas de hemoglobina que dão a coloração vermelha para essas células. A hemoglobina compreende uma molécula proteica, de estrutura quaternária, que tem, como principal função, o transporte de oxigênio aos tecidos. É composta por uma parte proteica (globina) e por um grupo prostético (grupamento heme). A parte proteica corresponde a duas globinas do tipo alfa e duas globinas do tipo beta que se diferem entre si pela sequência de aminoácidos que apresentam. Dessa forma, cada molécula de hemoglobina tem quatro cadeias globínicas e quatro grupamentos heme, sendo responsável pelo transporte de quatro átomos de oxigênio (em cada molécula).
Quando há a redução das moléculas de hemoglobina dentro das hemácias, a célula pode apresentar coloração mais tênue. A redução da quantidade de moléculas de hemoglobina presentes no sangue acarreta hipóxia e, consequentemente, uma redução na produção de ATP. Dessa forma, o indivíduo pode apresentar alguns sintomas, como palidez cutaneomucosa, fraqueza, tontura, sonolência, e taquicardia. Assim, a anemia é definida quando há a queda da quantidade de moléculas de hemoglobina circulante.
A dosagem da hemoglobina, geralmente, é determinada por metodologias que levam à hemólise das hemácias, medindo a densidade ótica da solução (contendo hemoglobina ou derivados dela) a partir da espectrofotometria.
Alguns fatores, como lipemia e leucocitose, podem acarretar erros na dosagem de hemoglobina, elevando o valor dela.
Os valores de hemoglobina são diferentes quando relacionamos o sexo e a idade.
Valor de referência para homem adulto: 13,5 –17,5 g/dL.
Valor de referência para mulher adulta: 12,0 –16,0 g/dL.
Valor de referência para recém-nascidos: 12,5 –21,5 g/dL.
O sangue total é composto por uma porção líquida denominada “plasma” e por uma porção que corresponde aos elementos figurados: hemácias, leucócitos e plaquetas. O hematócrito ou volume globular compreende o volume que os eritrócitos ocupam em uma determinada amostra de sangue. Para isso, o resultado é expresso em porcentagem e encontra-se relacionado ao volume plasmático.
A obtenção da porcentagem de eritrócitos da amostra pode acontecer a partir da metodologia manual ou de analisadores hematológicos. Quando o resultado é obtido a partir de um método manual, utilizando a centrifugação de capilares contendo sangue total, o parâmetro deveria receber o nome “hematócrito”. Quando a obtenção desse resultado acontece mediante a análise automatizada, o parâmetro deveria receber o nome “volume globular”. Nesse caso, o resultado é obtido de forma indireta a partir da seguinte fórmula:
Dessa forma, o volume globular e o hematócrito são sinônimos, dado que avaliam o mesmo parâmetro a partir de metodologias distintas. A elevação desse resultado pode estar relacionada à hemoconcentração da amostra, causada ou pelo aumento da produção de hemácias (policitemias) ou pela redução de plasma (desidratação). Já a redução dos valores pode estar relacionada às anemias, em que há a redução da produção de eritrócitos ou perda sanguínea (hemorragias).
Os valores do hematócrito/volume globular também podem variar de acordo com a faixa etária e o sexo.
Valor de referência para homem adulto: 40,0 – 53,0%.
Valor de referência para mulher adulta: 36,0 – 46,0%.
Valor de referência para recém-nascidos: 42,0 – 60,0%.
Assim, o objetivo desta aula é determinar o valor do hematócrito a partir da metodologia manual por confecção e leitura de capilar sanguíneo. Outro intuito é realizar a dosagem de hemoglobina mediante a análise em espectrofotômetro e interpretar os resultados obtidos.
Luvas
Estantes para tubos
Tubos com sangue total em EDTA
Capilares para hematócrito
Descarte de perfuro cortante
Cartão para leitura de hematócrito
Papel toalha
Álcool
Fósforo
Bico de Bunsen
Líquido de Drabkin
Padrão de hemoglobina
Tubos de ensaio
Pipetas de 5 mL
Micropipetas de 20 L
Ponteiras
Descarte de ponteiras
Papel absorvente
Espectrofotómetro
Preencher 2/3 do volume do capilar com sangue total homogeneizado em EDTA.
Selar a extremidade vazia do capilar na chama do bico de Bunsen.
Colocar o capilar na centrífuga de hematócrito com a extremidade selada e voltada para fora.
Centrifugar o capilar durante 3 a 5 minutos. A rotação das centrífugas de hematócrito geralmente é fixa.
Remover o capilar da centrífuga e limpar a parte externa do capilar, se necessário.
Realizar a leitura do hematócrito em escala própria (cartão de hematócrito): coincidir o menisco inferior das hemácias com a linha 0 (zero) no cartão e o menisco superior do plasma com a linha 100 do cartão.
Identificar a linha que passa entre as células vermelhas e o plasma, e delimitar a qual número ela pertence.
Anotar o resultado e interpretá-lo.
Aliquotar o líquido de Drabkin em um béquer.
Identificar três tubos de ensaio como “Amostra”, “Branco” e “Padrão”.
No tubo “Amostra”:
Pipetar 5 mL do líquido de Drabkin.
Adicionar 0,02 mL (20 µL) de sangue total homogeneizado em EDTA. Limpar a parte externa da ponteira com papel absorvente e lavar a ponteira no líquido diluidor.
No tubo “Padrão”:
Pipetar 5 mL do líquido de Drabkin.
Adicionar 0,02 mL (20 µL) de padrão. Limpar a parte externa da ponteira com papel absorvente e lavar a ponteira no líquido diluidor.
No tubo “Branco”:
Pipetar 5 mL do líquido de Drabkin em um tubo de ensaio.
Homogeneizar os tubos “Amostra” e “Padrão” por inversão.
Aguardar 5 minutos.
Realizar leitura em espectrofotômetro, com comprimento de onda ajustado para 540 nm.
Após a leitura, realizar o cálculo a seguir:
Anotar o resultado e interpretá-lo.
Imagem 1 – Leitura do hematócrito.
Fonte: o autor.
A leitura do resultado do hematócrito deve ser feita em escala própria (cartão de hematócrito). O menisco inferior das hemácias deve coincidir com a linha 0 (zero) do cartão e o menisco superior do plasma com a linha 100 do cartão. A linha que passa entre as células vermelhas e o plasma identifica o valor do hematócrito da imagem, que é 49% para os dois capilares.
Imagem 2 – Erros na confecção do capilar de hematócrito.
Fonte: o autor.
Os tubos 1, 2 e 3 apresentam hemólise. Esse erro pode ter ocorrido na fase pré-analítica ou até mesmo durante a confecção do capilar, no momento em que a extremidade é selada na chama. O capilar 1 também apresenta deformidade na base, ocasionada pela chama, o que pode implicar em erro de leitura. Os tubos 3 e 4 foram confeccionados adequadamente, apresentando o plasma de coloração normal e a base selada corretamente.
Imagem 3 – Estrutura da molécula de hemoglobina.
Fonte: o autor.
A imagem apresenta a estrutura de uma molécula de hemoglobina. Nas cores rosa e alaranjado, temos representadas as estruturas proteicas denominadas “globinas”, sendo duas globinas do tipo beta e duas globinas do tipo alfas. No interior de cada globina, temos o grupamento “heme”, representado pelas cores azul e vermelha. A parte azul do grupamento heme representa o anel porfirínico, enquanto a vermelha simboliza o átomo de ferro, o qual o oxigênio (representado pela cor amarela) se liga para ser transportado.
1) O profissional de um laboratório de análises clínicas realizou a confecção de um capilar com sangue, com o intuito de avaliar o hematócrito do paciente: J.S.F., sexo masculino. Analise a imagem a seguir e determine o valor do hematócrito do paciente.
2) A amostra de sangue de Joana, de 31 anos, foi entregue a um analista clínico para realizar a dosagem de hemoglobina. Para isso, foi realizada a leitura do “Branco”, “Padrão” e “Amostra”. A seguir, são expostos os resultados das absorbâncias:
Concentração do Padrão: 11,2g/dL
Branco: 0,000
Absorbância do Padrão: 0,273
Absorbância da Amostra: 0,193
Dessa forma, calcule o valor de hemoglobina da paciente e interprete o resultado.
1) O paciente apresenta um valor de hematócrito de 49%.
2)
A paciente tem um valor de hemoglobina de 7,9 g/dL. Dessa forma, apresenta um quadro anêmico.
FAILACE, R.; FERNANDES, F. Hemograma: manual de interpretação. Porto Alegre: Artmed, 2015.
SILVA, P. H. da et al. Hematologia laboratorial: teoria e procedimentos. Porto Alegre: Artmed, 2016.