Esta aula tem como objetivo analisar a concentração da glicose circulante no sangue. Para isso, utiliza-se a técnica da glicemia capilar ou glicemia em jejum, uma técnica enzimática colorimétrica com finalidade de que este reagente determine, de forma quantitativa, a glicose no sangue.
A glicose é a principal fonte de carboidrato do organismo e a sua concentração sérica está, intimamente, ligada à ação da insulina, enquanto o seu excesso está, diretamente, relacionado ao desenvolvimento da diabetes mellitus, desse modo, a quantificação da glicose torna-se importante na prática clínica.
A enzima glicose oxidase é responsável pela oxidação da glicose em ácido gliônico e peróxido de hidrogênio, este último, formado, reage com reagente (4-aminoantipirina e fenol), formando um complexo de cor vermelha (quinoneimina) cuja absorbância, medida em 505 nm, é diretamente proporcional à concentração de glicose na amostra. Esta reação é considerada enzimática colorimétrica de ponto final, rápida e direta, facilmente, adaptável em analisadores automáticos e semiautomáticos O teste de glicemia capilar permite acompanhar os níveis de glicemia no sangue durante o dia, avaliando a eficiência da dieta, da medicação oral e da administração da medicação. É, também, por meio destes resultados que o médico consegue avaliar a saúde do paciente e indicar a melhor conduta.
Amostra biológica fresca ou centrifugada.
Luvas.
Tubo a vácuo.
Centrífuga.
Ependorf.
Micropipetas 10 μL, 100 μL e 1000 μL.
Kit glicose PP.
Béquer 25 mL.
Glicômetro.
Fita reativa.
Estante de micropipetas.
Ponteira para micropipetas.
Banho-maria a 37 ºC.
Cronômetro.
Aparelho espectrofotômetro.
Descarte com parede rígida.
EPIs: avental, máscara, luvas descartáveis.
Certificar-se de que a fita reagente está na validade.
Orientar o paciente sobre o procedimento.
Realizar a higienização das mãos.
Ligar o aparelho e posicionar a fita e o glicosímetro de modo a facilitar a deposição da gota de sangue no local adequado.
Segurar a lanceta sem tampa e fazer leve pressão na ponta do dedo escolhido, de modo a favorecer o seu enchimento capilar.
Com a outra mão, limpar a área com algodão embebido em álcool 70%.
Com a lanceta ou agulha estéril fazer uma punção na ponta do dedo escolhido, preferencialmente, na lateral do dedo, onde a dor é minimizada.
Lancetar o dedo e obter uma gota suficiente para preencher o campo reagente.
Pressionar o local da punção com algodão até a hemostasia.
Atentar para pacientes em uso de anticoagulantes.
Informar o resultado obtido ao paciente.
Desprezar a fita reagente e a lanceta na caixa específica para material perfurocortante.
Retirar as luvas.
Registrar o valor obtido no prontuário do paciente.
Valores recomendados pela Associação Americana de Diabetes – ADA:
Glicemia em jejum: 70 a 99 mg/dL.
Glicemia pós-prandial até duas horas após alimentação: 70 a 140 mg/dL.
Conferir os reagentes do KIT, sendo eles:
Padrão – Contém glicose 100 mg/dL.
Reagente de cor – Contém tampão fosfato pH 7,5, fenol 5,0 mmol/L, glicose oxidase 10000 U/L, peroxidase 1000 U/L, 4-aminoantipirina 0,4 mmol/L e azida sódica 7,7 mmol/L.
Plasma, soro: amostra de sangue obtida com jejum de, no mínimo, oito horas ou de acordo com recomendação médica. O anticoagulante utilizado pode ser fluoreto ou heparina, as amostras de sangue não contendo antiglicolítico devem ser centrifugadas, imediatamente, após a coleta, e o plasma ou o soro separados das células ou do coágulo.
Método de Ponto Final com comprimento de onda em 505nm.
Identificar três tubos de ensaio com “Branco”, “Teste" e “Padrão” seguindo a ordem:
Homogeneizar e incubar os tubos em banho-maria a 37 ºC por dez minutos.
Ler a absorbância do Padrão (AP) e do Teste (AT), zerando o aparelho com o Branco em 505 nm, com cor é estável por 30 minutos.
CÁLCULO
CP = Concentração do Padrão.
AP = Absorbância do Padrão.
CT = Concentração do Teste.
AT = Absorbância do Teste.
FC = CP ÷ AP
CT em mg/dL = FC x AT
Sociedade Brasileira Diabetes Mellitus
Sociedade Brasileira Diabetes Mellitus
1) Observe os resultados do exame dos pacientes, a seguir, e responda:
**CP = 100 mg/dL
a) Calcule os valores em mg/dL de cada paciente.
b) Aponte os resultados de cada paciente, baseando-se nos valores de referência.
** Valores de referência segundo a American Diabetes Association – ADA de glicemia em jejum:
Valores normais: 70,0 a 99,0 mg/dL.
Glicemia de jejum alterada: entre 100 mg/dL e 125 mg/dL.
Diabetes: igual ou superior a 126 mg/dL.
Glicemia de jejum baixa ou hipoglicemia: igual ou inferior a 70 mg/dL.
1) CP = 100 mg/dL
AP = 0,355
FC = CP ÷ AP = 100 ÷ 0,333 = 281,69
PACIENTE 1: CT (mg/dL) 🡪 FC x AT = 281,69 x 0,313 = 88,16 mg/dL
PACIENTE 2: CT (mg/dL) 🡪 FC x AT = 281,69 x 0,405 = 114,08 mg/dL
PACIENTE 3: CT (mg/dL) 🡪 FC x AT = 281,69 x 0,510 = 143,66 mg/dL
PACIENTE 4: CT (mg/dL) 🡪 FC x AT = 281,69 x 0,320 = 90,14 mg/dL
Sendo assim:
PACIENTES 1 e 2 – Normoglicêmicos.
PACIENTE 3 – Glicemia de jejum alterada.
PACIENTE 4 – Diabetes.