perfil hematológico
 

 

 

 

PROPÓSITO DEL EXAMEN:   

 

El hemograma consiste, básicamente, en el conteo de los diferentes tipos de células que se encuentran en sangre periférica. Bajo el nombre de hemograma se agrupan dos conceptos: uno (1) cuantitativo, que comprende los recuentos de eritrocitos, leucocitos y plaquetas, cuantificación de hemoglobina, medición de hematocrito y en cálculo de indices eritrocitarios y dos (2) otro cualitativo (fórmula leucocitaria), que es la identificación microscópica o automatizada de los diferentes tipos de leucocitos y su expresión en valores porcentuales y absolutos.

Este exámen, en la actualidad, constituye uno de los más ampliamente utilizados, en el reconocimiento inicial de pacientes que consultan por patologías diversas. Además representa una herramienta insustituible, en el monitoreo de evolución de patología hematológica y control terapéutico.         

En este contexto, la automatización del hemograma, una combinación de metodologías de colorimetría, impedancia eléctrica e informática (Celldyn 1400) ha permitido obtener un método confiable y rápido para enfrentar la demanda creciente por el perfil hematológico.

 

El analizador hematológico CELLDYN 1400 proporciona información de 12 parámetros obtenidos, a partir de muestra de sangre total anticoagulada con EDTA, de la manera siguiente:

 

Medición directa de:

glóbulos rojos (RBC).

glóbulos blancos (WBC).

plaquetas (PLT).

concentración de hemoglobina (HGB).

 

Parámetros derivados, obtenidos de histogramas:              

porcentaje de Linfocitos (% L)

porcentaje de Granulocitos (%G)

volumen corpúscular medio (MCV)

 

Parámetros calculados de los datos medidos y derivados:

número total de Linfocitos (LYN)

número total de Granulocitos (GRAN)

hematocrito (HCT)

hemoglobina corpuscular media (MCH)

concentración de Hb corpúscular media (MCHC)

 

 

PRINCIPIO DEL METODO:

 

 

El CELLDYN 1400  utiliza el principio de la IMPEDANCIA O RESISTENCIA ELECTRICA para el recuento y clasificación por tamaño de las células sanguineas.

 La célula, al pasar a través de un orificio en el que hay una diferencia de potencial conocida, induce un pulso eléctrico que es directamente proporcional al volumen celular, lo que es aprovechado (por la diferencia de tamaño de los linfocitos, y granulocitos), para realizar una fórmula de dos parámetros.

Para esto la muestra es diluida, automáticamente, con una solución de conductividad fija.

Luego esta muestra es conducida, unidireccionalmente, a través de una apertura u orificio de tamaño determinado.

La no devolución de la muestra está asegurada por el transductor de Von Behrens que impide la recirculación de la misma.

Una corriente eléctrica constante pasa entre electrodos ubicados a cada lado de la apertura determinando una zona de censado a lo largo de toda la pertura.

Durante el ciclo de medición, cada célula que atraviesa la zona de censado, interrumpe el flujo de corriente constante generando un pulso eléctrico cuya amplitud es directamente proporcional al tamaño de la célula.

 El número de pulsos generados durante cada medición corresponde al número dé células censadas.

Los pulsos eléctricos generados son primero amplificados y luego comparados con voltajes en canales de referencia  que han sido previamente calibrados para aceptar sólo señales con una amplitud predeterminada.

Dos o más células pueden coincidir simultáneamente en la zona de censado durante el ciclo de medición. En cuyo caso se obtiene un pulso de gran amplitud, el cual es reconocido y rechazado, produciéndose una pérdida de pulsos aceptables. Esta pérdida se puede predecir estadísticamenete, de manera que los  recuentos celulares son corregidos automáticamente.

 

 

El CELLDYN   1400 realiza  MEDICION  DE  HEMOGLOBINA  utilizando el método de     la formación de cianometahemoglobina, que  se  determina  con  espectrofotómetro     a 540 nm.

Para esto, a una muestra diluida 1:250 se le adiciona un agente lisante, cuya función es romper los glóbulos rojos y liberar la hemoglobina.

Después de la medición el instrumento se lava con el reactivo detergente quedando listo para otro ciclo de medición.

 

 

ESPECIFICACIONES DE EJECUCION

 

SENSIBILIDAD

Las lecturas son confiables en el siguiente rango:

Leucocitos           1.000  -  100.000       mm3                (   1  -  100    K/uL )

Hematies             1.0     -    7,0             millones/mm3    (   1  -   7      M/uL )

Hemoglobina        2.5     -    24,0          g/dl

Plaquetas            10     -    999             k/UL       

  

BACKGROUND NORMAL ( RECUENTO DE FONDO )

Una vez realizado el ciclo de limpieza ( mantenimiento diario ) los recuentos del backgraund no deben exceder los siguientes limites:

Leucocitos           menor o igual a      500     /mm3                   (   0.5    K/uL )

Hematies              menor o igual a    0.05    millones/mm3        (   0.05  M/uL )

Hemoglobina        menor o igual a      0.2       g/dl

Plaquetas             menor o igual a      10.000  /mm3                  ( 10   K/uL )

 

IMPRESIÓN DE LISTADO DE RESULTADOS ( RESUMEN )

El equipo almacena, en memoria constantemente, los registros de las ultimos  320 muestras procesadas.

Por lo tanto, antes de alcanzar esta cifra,  se debe imprimir y archivar el listado de resultados a modo de registro de resultados de examen: 

 

TIPO Y RECOLECCION DE MUESTRA

La muestra corresponde a sangre venosa, obtenida por venopunción, recogida en tubos con anticoagulante EDTA/ K3

  

EQUIPO Y REACTIVOS REQUERIDOS

 

Contador hematológico CELL DYN 1400.

Agitador de muestras mecánico.

Reactivo Detergente para Celldyn 1400.

Reactivo Diluyente para Celldyn 1400.

Reactivo Lisante para Celldyn 1400.

 

Estos reactivos no deben exponerse a la luz directa del sol.

No deben mezclarse.

No adicionar restos de uno en otro nuevo.

 

Estos reactivos deben mantenerse  y utilizarse dentro de un rango de temperatura

entre los 15   y   30 ° C  para asegurar su conductividad.

 

 

 

PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACION.

El funcionamiento del equipo se chequea diariamente, en base al programa de control de calidad interno del laboratorio.

Cuando el control aconseje calibrar el instrumento, se puede seguir una de tres formas calibracion siguientes:

*         Calibracion con calibrador comercial.

*        Calibracion con sangre fresca.

         Calibracion mediante entrada de factor.

 

Procedimiento de calibracion.

Presionar  MAIN.

Presionar  CALIBRATION.

Seleccionar FRESH BLOOD o CALIBRATOR.

Seleccionar el o los parámetros a calibrar e ingrese los valores de referencia de la muestra o calibrador.

Si se utiliza muestra de sangre fresca, esta debe tener menos de 4 horas de recolectada.

Nota: Los valores de referencia aceptables, para calibración con sangre fresca, deben ajustarse a limites establecidos para el equipo.

Los cuales son:

WBC :    entre      5.0  y  12.0

RBC  :    entre      3.5  y   5.5

HGB  :    entre      10  y   24

PLT   :    entre     150 y   400

La morfologia celular debe ser normal.

La muestra debe estar libre de hemólisis, lipemia y otras sustancias como drogas etc.

Luego del ingreso de los valores, pasar la muestra para la medición. Repetir el procedimiento hasta lograr la calibración. Esto sucede luego de las tres primeras mediciones. Si uno o más parámetros no es reproducible, se requerirán ciclos de medición extras.

Presionar RETURN, aparecen los parámetros calibrados con los factores obtenidos.

Presionar MAIN , seleccionar RUN y procesar controles para confirmar la calibración.

 

Calibración mediante entrada de factor:

Presionar Calibration.

Presionar ENTER FACTOR

Con el cursor posicionarse en la entrada de factor correspondiente e ingresar nuevo factor.

Esta opción permite ingresar directamente los valores de factores de calibración. La calibración es programable cuando se introduce un factor de 1.00

Ejemplo: Si los recuentos de leucocitos estás aumentados en un 2%, el operador puede ingresar como factor 0,98 para disminuir los recuentos en un 2%.

 

PASOS DEL PROCEDIMIENTO

Como muestra se utiliza sangre venosa recogida en EDTA ( tobo tapa Lila).

La muestra debe agitarse por inversión, cuidando no someterla a excesiva agitación que pueda destrozar los elementos o alterar el volumen celular.

La muestra debe invertirse de 10 a 15 minutos si se hace a mano.

En agitador mecánico: de 5 a 15 minutos.

Nunca agitarlarlas más de 30 minutos.

 

Muestras procesadas hasta 8 horas de la recolección dan resultados confiables.

La muestra puede diluirse, previo a la medición, utilizando diluyente para CELLDYN o suero fisiológico. La dilución 1:10 es suficiente en la mayoría de las situaciones de parámetros elevados más allá del limite superior de lectura.

 

Para su proceso, colocar el tubo con la muestra debajo de la sonda de aspiración.

Apretar la palanca que está detrás. Automáticamente la sonda aspirará 30 ul de muestra. Espere el beep de término de aspiracióndel equipo antes de retirar el tubo. En este momento la muestra aspirada será automaticamente diluida, repartida en diferentes circuitos, incubada con reactivos específicos (lisis,hemoglobinometría) y leída por los dispositivos correspondientes.

 

Ingresar identificación del exámen (digitar número de folio del exámen). Presionar ENTER.

 

PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD

El programa de control de calidad del exámen, se realiza en base a dos elementos:

-Verificación de Resultados en asociación con la sección de hematología del Lab.Central.

-Verificación de constantes hematológicas con relación al programa de control interno  del equipo. ( Programa de la media X - B )  

 

Verificación de Resultados en asociación con la sección de hematología del Lab.Central.

 

Consiste en analizar diariamente una muestra de sangre proporcionada por la sección de hematología del Laboratorio Central. Esta muestra es procesada como una muestra más de la rutina. Los resultados son remitidos a la sección de hematología para su análisis.

Esta muestra de control  es procesada, en sección hematología, en dos autoanalizadores hematológicos ( Celldyn 3500 y Micros ABX ) y comparados sus resultados entre los tres analizadores y con la medición del hematocrito procesado manualmente.

El análisis de calidad de los resultados de la muestra control, se relaciona con la reproducibilidad de resultados entre los distintos equipos, considerando el hematocrito manual y la verificacion microscópica de la muestra.

La comparación de resultados de muestras de control, con resultados de equipos de sección de hematología, se basa en la calibración de estos con calibradores comerciales y controles comerciales.

 

 

                  Verificación de constantes hematológicas con relación al programa de control interno  del equipo.    Programa de la media X - B

Permite revisar los valores para VCM, HCM y CHCM calculados según el método Levey-Jennings para grupos de 20 muestras. La impresión del reporte proporciona una gráfica de los resultados.

 

INTERFERENCIAS

 

Los resultados del exámen pueden verse interferidos por la presencia  de diferentes elementos de la siguiente forma:

 

WBC:     falso incremento por crioglobulinas, heparina, proteinas monoclonales, eritroblastos, agregados     plaquetarios.

             falso descenso por coágulos, células atípicas, uremia+inmunosupresores.

 

RBC:     falso incremento por crioglobulinas, macroplaquetas, hemólisis,  policitemia.

             falso descenso por crioaglutininas, microcoágulos,células microcíticas.

 

HGB:     falso incremento por crioglobulina, carboxihemoglobinahemólisis,hiperbilirrubinemia, lipemia severa.

            falso descenso por microcoágulos.

 

Hematocrito:falso incremento por crioglobulina, macroplaquetas, hiperglicemia (600                mg/dl)

            falso descenso por coágulos, hemólisis.

 

PLT:       falso incremento por crioglobulinas, hemólisis, hematies microcíticos.

             falso descenso por macroplaquetas, heparina, agregados plaquetarios,

                 

 

 

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO PARA CALCULAR RESULTADOS

 

El equipo realiza la medición directa, por impedancia y colorimetría de:        

glóbulos rojos (RBC).

glóbulos blancos (WBC).

plaquetas (PLT).

concentración de hemoglobina (HGB).

 

Los resultados para Parámetros derivados,  se obtienen de datos de distribución de elementos medidos ( histogramas ):              

porcentaje de Linfocitos (% L)

porcentaje de Granulocitos (%G)

volumen corpúscular medio (MCV)

 

Los Parámetros calculados de los datos medidos y derivados son:

número total de Linfocitos (LYN)

número total de Granulocitos (GRAN)

hematocrito (HCT)

hemoglobina corpuscular media (MCH)

concentración de Hb corpúscular media (MCHC)

 

Cálculo de Hematocrito:  Es la razón de eritrocitos en un volumen de plasma y se expresa como porcentaje  del volumen de sangre total.

 

 

                                     HCT =  RBC  x  VCM

                                                      10

 

Cálculo de hemoglobina corpuscular media: Expresa el contenido medio de Hb que hay los hematies. Se expresa en picogramos.

 

 

                                     HCM  =  Hb (gr/lt )  x  10

                                                        RBC

 

 

Cálculo de concentración de Hb corpuscular media: Es la razón entre la hemoglobina respecto al hematocrito. Indica la concentración de Hb en el promedio de los eritrocitos.

 

                                     CHCM  =  Hb  x  100

                                                        HCT

 

 

 

REPORTE E INTERPRETACION DE RESULTADOS

 

El reporte incluye los siguiente parámetros:

1.- Número de hematies: por medición directa se obtiene el número de GR por volumen.

2.- Concentración de Hb: por medición directa por espectrofotometría (método de la cianmetahemoglobina). El valor puede estar falsamente aumentado en hiperleucocitosis. Se utiliza para la valoración de anemia.

3.- Volumen corpúscular medio (VCM): derivado de histograma de distribución, representa la media del volumen de los hematies. Define la micro-normo-macrocitosis.

4.- Hematocrito: es la relación entre el volumen de los hematies respecto a la sangre total. Se obtiene de multiplicar el VCM por el número de hematies. Es discretamente inferior al obtenido por centrifugación. Se utiliza como indicador de anemia, hemorragia, hemoconcentración, etc.

5.- Hemoglobina corpúscular media (HCM): resulta de dividir la concentración de Hb por el numero de hematies. Se usa como marcador hipocromía.

6.- Concentración de Hb corpúscular media (CHCM): es la cantidad de hemoglobina que hay en un decilitro de hematies. Su valor normal es 34 y la desviación standard de 2 %. La CHCM es el método más útil para detectar la deshidratación del eritrocito. En la microesferocitosis familiar está sobre 36 (mg/dl) en el 50% de los casos. La CHCM disminuida bajo 30 %, se considera marcador de hipocomía y se ve en condiciones que llevan a una síntesis insuficiente de Hb.

7.- Numero de plaquetas: se mide directamente el número de plaquetas por volumen.

8.- Numero de leucocitos: es el conteo de células de determinado tamaño que resisten el prcedimiento de lisis específica para los hematies. Se mide directamente

9.- Fórmula leucocitaria: Derivado de histograma, corresponde al porcentaje de linfocitos y granulocitos.

Neutófilos elevados, acompañaddo de fiebre, indica probabilidad de infección por bacterias. Neutrófilos disminuidos pueden deberse a infección severa, reacción a drogas, irradiación o acompañar ciertos tipos de anemia.

Linfocitos elevados se asocia más frecuentemente con infección viral. Pero también esta elevaciòn se observa en cuadros hematológicos como la Leucemia de tipo linfoide.

 

Una correcta interpretación del exámen, en función de los hallazgos clínicos, permite una orientación diagnóstica en muchos casos, también constituye en otros, un importante elemento en el pronóstico y tratamiento.

La concentración de eritrocitos, leucocitos y plaquetas en la sangre varia con la edad y  sexo.

En clínica pueden observarse aumentos o disminuciones patológicas de los niveles de estos elementos que no siempre obedecen a enfermedades del sistema hematopoyético. También se observan fluctuaciones de orden fisiológico como en el embarazo, el ejercicio, stress o ritmo circadiano.

El aumento de la concentración de eritrocitos, de contenido hemoglobínico normal, suele acompañarse del aumento de la concentración de hemoglobina y se denomina poliglobulia. Cuando el aumento de la concentración de eritrocitos se acompaña de disminución del contenido hemoglobínico, se habla se pseudo poliglobulia. La pseudopoliglobulia puede acompañarse de microcitosis e incluso anemia, como por ejemplo en la talasemia, anemia ferropénica ( pseudopoliglobulia microcitica ).

El descenso de la concentración de eritrocitos en sangre se acompaña siempre de la disminución de la concentración de

Hemoglobina ( anemia ) y puede obedecer a una pérdida por hemorragia, a hemólisis o a una falta en su formación a nivel de la médula osea.

El aumento de la concentración de leucocitos se denomina Leucocitosis y puede obedecer a muchas causas, entre las que destacan los procesos infecciosos e inflamatorios agudos y crónicos.. Cuando se utilizan sistemas automatizados de recuento, debe tenerse presente que estos no diferencian entre  eritroblastos y leucocitos ( debido a que ambas células tienen núcleo ), por lo que si en la observación microscópica  del frotis se aprecia una cifra de eritroblastos superior al 10 % se debe proceder a una corrección del recuento leucocitario:

 

Luecocitos reales  =            Leucocitos contados   x   100

                                     Eb(por 100 leucocitos)  +  100                            donde Eb: eritroblastos

 

La disminución de concentración de leucocitos se denomina leucopenia y en caso de insuficiencia medular grave ( aplasia medular ) se acompaña casi siempre de anemia y trombocitopenia. La leucopenia afecta siempre la totalidad de los leucocitos circulantes, en especial los más abundantes ( neutrófilos y linfocitos ). La disminución selectiva de granulocitos neutrófilos se llama agranulocitosis o neutropenia y la de linfocitos, linfopenia. Debe descartarse que una leucopenia aislada de evolución prolongada sea el primer signo  de una enfermedad hematológica grave (leucemia, linfoma o anemia refractaria).

El aumento de la concentración de plaquetas se denomina trombocitosis, mientras que su disminución se denomina trombopenia.

 

Utilidad clinica de los indices eritrocitarios:

Anemia microcitica: VCM  < 80 fL

Anemia macrocitica: VCM  > 100 fL

Anemia normocitica: VCM  =  80 100 fL

Anemia hipocroma  HCM  < 30 pg

 

Causas de anemia microcitica-hipocroma:

Ferropenia o carencia de hierro, talasemia.

 

Causas de anemia macrocitica:

Deficit de vitamina  B12 o acido folico, hepatopatias cronicas, alcoholismo, tabaquismo.

 

La determinación de CHCM es útil para detectar aumentos de la concentración hemoglobínica intraeritrocitaria, ya que en este caso es siempre superior a 35 g/dL. El aumento de la CHCM nunca obedece a un aumento de la síntesis de Hb, sino siempre a una alteración de la membrana o del contenido acuoso del eritrocito: disminución de la relación entre la superficie y volumen eritrocitario (esferocitosis) o pérdida de agua deshidratación eritrocitaria (xerocitosis).

 

 

         VALORES DE REFERENCIA

 

EDAD

WBC

(K/Ul)

RBC

(M/uL)

HGB

(g/dl)

Hto

(%)

VCM

(fL)

HCM

(pg)

CHCM

(g/dl)

Plaquetas

(K/uL)

0-2 sem

9.0-30.0

4.1-6.1

14.5-24.5

44-64

98-112

34-40

33-37

150-450

2-8 sem

5.0-21.0

4.0-6.0

12.5-20.5

39-59

98-112

30-36

32-36

150-450

2-6 mes

5.0-19.0

3.8-5.6

10.7-17.3

35-49

83-97

27-33

31-35

150-400

6m-1a

5.0-19.0

3.8-5.2

9.9-14.5

29-43

73-87

24-30

32-36

150-400

1- 6 a

5.0-19.0

3.9-5.3

9.5-14.1

30-40

70-84

23-29

31-35

150-400

6-16 a

4.8-10.8

4.0-5.2

10.3-14.9

32-42

73-87

24-30

32-36

150-400

16-18 a

4.8-10.8

4.2-5.4

11.1-15.7

34-44

75-89

25-31

32-36

150-400

>18 a h

5.0-10.0

4.5-5.5

14.0-17.4

42-52

84-96

28-34

32-36

140-400

>18 a m

5.0-10.0

4.0-5.0

12.0-16.0

36-48

84-96

28-34

32-36

140-400

 

 

 

  

 

 FUENTES POTENCIALES DE VARIABILIDAD

 

  Temperaturas sobre 30 grados celsius pueden concentrar los reactivos, por evaporación   alterando los resultados. Temperaturas menores de 15 grados pueden precipitar o inactivar los reactivos.

 

Voltaje red eléctrica. El equipo trabaja con 220 voltios y 50 Hertz. Grandes oscilaciones de voltage de la red pueden alterar los recuentos.

       

Equipos de rayos X. fotocopiadoras, computadoras, centrífugas no deben ser instaladas cerca del CELLDYN para prevenir interferencias.

 

 

 NOTAS ADICIONALES

 

En caso de pérdida de presión de vacío del sistema, descubrir el panel frontal y llenar manualmente la copa de dilución con reactivo diluyente ( 15 ml aprox.), luego pulsar

Run.

 

 

              REFERENCIAS

 

1.  Guido Osorio Solis,Hematología Técnicas y Procedimientos de Laboratorio.1996   Publicaciones Técnicas Mediterraneo.

                  

              2.  Etcheverry Raul,Interpretación del Hemograma.1986 Publicaciones Técnicas  Mediterraneo.

 

3.  L.Vives,J.L.Aguilar.: Manuel de Técnicas de laboratorio en hematología. Salvat,1987,  Barcelona

 

              4.   User Reference Manual for Celldyn 1400, Abbott Diagnostics.