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Apéndice 25. Variedad de métodos para la determinación del genotipo ABO



Antes de nuestra elucidación de las bases genetico-moleculares del sistema ABO de grupos sanguíneos humanos en 1990, era imposible distinguir los glóbulos rojos de los individuos con un genotipo AA de glóbulos rojos procedentes de individuos con un genotipo AO. La determinación de las secuencias de nucleótidos de los alelos ABO y la identificación de un polimorfismo de nucleótido siemple entre los alelos nos permitió genotipar el locus genético ABO. Se utilizaron dos métodos diferentes en el estudio original. Para discriminar tanto el alelo O específico de deleción de un único nucleótido  (que se cortó con KpnI) como los alelos sin la deleción (que se escindieron con BstEII) se realizó la técnica de fragmentos de restricción polimórficos (RFLP), seguida de hibridación de DNA (“Southern  transfer”) con una sonda de la transferasa A humana. Para amplificar los fragmentos de DNA que contenían las diferencias en la secuencia de nucleótidos entre los alelos A / O y B se utilizó PCR. Los fragmentos de DNA amplificados fueronsometidos posteriormente a una digestión específica de alelo con enzimas de restricción (BssHII y HpaII para los alelos A / O y NarI y AluI para el alelo B). Más tarde realizamos con éxito una PCR específica de alelo utilizando cebadores marcados con fluorescencia. Sin embargo, decidimos no publicar los resultados porque Hood y sus colegas reportaron el uso de la LCR (reacción en cadena de la ligasa) para discriminar los alelos ABO usando fluorescencia para su detección. Más tarde, una variedad de métodos también se han aplicado al genotipaje de ABO para detectar el polimorfismo de nucleótido simple.
 
 
 
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