10. Polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) (alelos A/B al frente alelo O)


Una vez identificadas estas
importantes diferencias, observamos dianas de restricción en varios de los sitios diferenciados. Por ejemplo, la secuencia que contiene específicamente el alelo O de deleción de un solo nucleótido puede ser cortados con KpnI, mientras que la secuencia sin la eliminación puede ser cortado por BstEII. En este experimento de” Southern hybridization” (hibridación del DNA), el DNA genómico de las células de líneas celulares que se utilizaron para preparar la biblioteca de cDNA se escindieron con BstEII o con KpnI, y luego sometidas a electroforesis, a una transferencia de DNA (“Southern transferred”) y se hibridaron con una sonda contra la transferasa A marcada radioactivamente. El DNA génomico de MKN45 se escindió con BstEII, pero no con KpnI. Por el contrario, la mitad del ADN genómico de SW1417 se escindió con BstEII y la mitad restante se escindió con KpnI, lo que muestra que esta línea celular es heterocigota.
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