Catalase é a enzima que quebra o peróxido de hidrogênio (H2O2) em H2O e O2. Peróxido de hidrogênio é frequentemente usado como desinfetante tópico em feridas, e o borbulhamento que é visto é devido a evolução do gás O2. H2O2 é um agente oxidante potente que pode causar estragos em uma célula. Qual a razão disso, qualquer célula que usa O2 ou que pode viver na presença de O2 deve ter uma maneira de se livrar do peróxido. Uma dessas maneiras é fazer catalase.
1- Coloque uma pequena quantidade de sua cultura em uma lâmina de microscópio limpa. Se estiver usando colônias de uma placa de ágar sangue, tenha muito cuidado para não raspar qualquer parte do ágar sangue - as células sanguíneas são catalase positiva e qualquer ágar contaminante pode dar um falso positivo.
2- Adicione algumas gotas de H2O2 no esfregaço. Se necessário, misture com um palito. Não use uma alça de metal ou agulha com H2O2; dará um falso positivo e degradará o metal.
3- Um resultado positivo é a rápida evolução de O2 evidenciada pelo borbulhamento.
4- Um resultado negativo é sem bolhas ou apenas algumas bolhas espalhadas.
5- Descarte sua lâmina no recipiente de eliminação de vidro de risco biológico. Descarte qualquer palitos de dente do porta pipetas.
Basicamente, este é um teste para ver se um organismo é um aeróbio. É uma verificação da presença de cadeia de transporte de elétrons que é a fase final da respiração aeróbica. Normalmente, o oxigênio é o aceitador de elétron final para este sistema. No teste da oxidase, um aceptor final de elétrons artificial (Dicloridrato de N, N, N ’, N’-tetrametil fenilenodiamina) é usado no lugar do oxigênio. Este aceptor é uma substância química que muda de cor para azul escuro / roxo quando tira o elétron de o último elemento (citocromo oxidase) na cadeia de transporte de elétrons. (uma observação – bacteria não tem mitocôndria. Entretanto, na parte interna de sua parede celular pode possuir enzimas que vão alé da via glicolítica).
Observação:
O laboratório tem muitos frascos que gotejam os reagentes. Utilizem somente um. Compartilhem os frascos abertos.
1- Para abrir um novo dispensador de reagente: Segure o conta-gotas de reagente na vertical e aponte a ponta para longe de seu corpo. Abra com cuidado e utilize o conta gota que vem com o kit.
2- Com um cotonete esterilizado, obtenha uma pequena quantidade de uma colônia de um ágar inclinado ou placa de crescimento.
3- Coloque uma gota do reagente na cultura do cotonete.
4- As reações positivas transformam as bactérias de violeta a roxo imediatamente ou em 10 a 30 segundos. As reações retardadas devem ser ignoradas.